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        细胞通透化

        相关实验:转运反应成分的制备实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒

        步骤

        1. 制备用于同透化的细胞

        (1) 对于在盖玻片上生长的细胞

        ① 将在标准条件下培养的细胞或从组织采集的原代细胞铺在置于 6 孔培养板中的 18x18 mmol/L 的盖玻片上,生长过夜。

        ② 实验前 2~4 小时,换新培养液,重新放回培养箱中。

        ③ 吸出培养基,用转运缓冲液清洗细胞两次。

        ④ 将细胞转入含有转运缓冲液和 40~50 μg/ml 的毛地黄皂苷的 Coplin 缸或载玻片容器中,或者用 2 ml 含毛地黄皂苷的转运缓冲液换掉 6 孔培养板中的缓冲液。孵育 5 分钟。

        (2) 悬浮培养的细胞

        ① 培养细胞至半对数生长期,500 g 离心 5 分钟收集细胞。

        ② 用转运缓冲液 500 g 离心 5 分钟清洗细胞两次。

        ③ 用含 40~50 μg/ml 毛地黄皂苷的转运缓冲液重悬浮细胞,浓度为 5x105 细胞/ml 孵育 5 分钟。

        2. 去掉毛地黄皂苷溶液,换上新鲜的转运缓冲液。

        3. 通过细胞排阻台盼蓝情况监测通透化程度。

        来源:丁香实验

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