免疫酶标技术

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

这是最常用的免疫细胞化学技术。它把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化作用有效地结合起来，本技术有免疫荧光的优点，又克服了它们的缺点。内容来源：组织培养和分子细胞学技术。（北京出版社）

来源：丁香实验

操作方法

直接法

1. 标本固定； 2. PBS洗涤2×3 分钟； 3. 1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）抑制内源性过氧化物酶，室温10～20 分钟； 4. 正常血清（1：10）孵育，室温20 分钟； 5. 滴加酶标记的抗体37 ℃1 小时或4 ℃过夜； 6. PBS洗3×3 分钟； 7. DAB+H2O2显色5～10 分钟，镜下控制染色结果。DAB+H2O2应

间接法

1. 标本固定； 2. PBS洗涤2×3 分钟； 3. 1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）抑制内源性过氧化物酶，室温10～20 分钟； 4. 正常血清（1：10）孵育，室温20 分钟； 5. 滴加第一抗体，37 ℃1 小时或4 ℃过夜； 6. PBS洗3×3 分钟； 7. 滴加酶标二抗，室温一小时； 8. PBS洗3

PAP法（过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法）

1. 标本固定后，PBS洗涤； 2. 1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）阻断内源性过氧化物，室温10～20 分钟； 3. PBS洗2×3 分钟； 4. 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20 分钟； 5. 滴加一抗，室温1 小时或4 ℃过夜； 6. PBS洗3×3 分钟； 7. 滴加二抗，室温30 分钟；

双PAP法

ABC法（卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法）