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        ABC法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法)

        相关实验:免疫酶标技术

        最新修订时间:

        原理

        由于卵白素与生物素具有高度亲和力,可形成卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC复合物),ABC 复合物与生物素化二抗结合,最后形成抗原-抗体-生物素体二抗-ABC复合物。该方法比单PAP法灵敏,背景染色低,受到广大研究工作者的观迎。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  标本固定后,PBS洗涤;

        2.  1 %H2O2(或1 %H2O2甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10~20 分钟;

        3.  PBS洗2×3 分钟;

        4.  正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20 分钟;

        5.  滴加一抗,室温1 小时或4 ℃过夜;

        6.  PBS洗3×3 分钟;

        7.  滴加二抗,室温30 分钟;

        8.  PBS洗3×3 分钟;

        9.  加ABC液(A与B液等量,于用前30 分钟混合),室温60 分钟;

        10.  PBS洗;

        11.  0.04 %DAB+0.03 %H2O2显色5~10 分钟;

        12.  充分水洗;

        13.  苏木精复染、封片、镜检。

        注意事项

        在各种免疫细胞化学技术中,都需要注意的是:

        1.  在整个染色过程中,标
        本不能干燥,各步骤之间应充分洗涤。

        2.  上述各项方法操作简繁不等,快慢不一,敏感性、
        特异性也有不同,成本费用有高有低。

        3.  在实验中选用哪种方法,主要取决于实验目的和
        实验室条件。

        4.  为了取得可靠的结果,应严格设置阳性对照和阴性对照,如果出现假阴性
        或假阳性以及背景染色过深等问题时,应从标本质量、一抗及其它试剂的质量、稀释度及操作步骤等方面分析和寻找原因,并有针对性地加以解决和克服,即会取得满意效果。

        来源:丁香实验

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