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        细胞免疫化学:免疫酶标技术

        互联网

        1851

        1.标本固定。
        2.PBS洗涤2×3分钟。
        3.1% H 2 O 2 (或1% H 2 O 2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。
        4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。
        5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。
        6.PBS洗涤3×3分钟。
        7.DAB+H 2 O 2 显色5~10分钟,镜下控制染色结果。DAB+H 2 O 2 应用前15分钟配制。
        8.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

        2 间接法  免疫学实验技术论坛   http://bbs.bbioo.com/forum-140-1.html

        1.标本固定。
        2.PBS洗涤2×3分钟。
        3.1%H 2 O 2 (或1%H 2 O 2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。
        4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。
        5.滴加第一抗体,37℃1小时或4℃过夜。
        6.PBS洗涤3×3分钟。
        7.滴加酶标二抗,室温1小时。
        8.PBS洗涤3×3分钟。
        9.0.04%DAB+0.03 %H 2 O 2 显色5~10分钟。
        10. 充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

        3 PAP 法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法)

        1.标定固定后,PBS洗涤。
        2.1%H 2 O 2 (或1%H 2 O 2 甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10~20分钟。
        3.PBS洗涤2×3分钟。
        4.正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20分钟。
        5.滴加一抗,室温1小时或4℃过夜。
        6.PBS洗涤3×3分钟。
        7.滴加二抗,室温30分钟。
        8.PBS洗涤3×3分钟。
        9.加PAP复合物,室温60分钟。
        10. PBS洗涤3×3分钟。
        11. 0.04%DAB+0.03% H 2 O 2 显色5~10分钟。
        12. 充分水洗。
        13. 苏木精复染,封片观察。

        4 PAP

        1~10同单PAP法。
        11. 二次加酶标二抗。
        12. PBS洗。
        13. 二次加PAP。
        14. PBS洗。
        15. 0.04%DAB+0.03 %H 2 O 2 显色5~10分钟。
        16. 苏木精复染核,封片,镜检。

        5 ABC 法(卵白素- 生物 素-过氧化物酶复合物法)

        1~8同PAP法
        9)加ABC液,室温60分钟。
        10) PBS洗。
        11) 0.04%DAB+0.03% H 2 O 2 显色5~10分钟。
        12) 充分水洗。
        13) 苏木精复染核,封片,镜检。

         

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