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        双PAP法

        相关实验:免疫酶标技术

        最新修订时间:

        原理

        这种方法可在复合物体系中连接更多的PAP复合物,对抗原可进一步放大,因此灵敏度更为增强,适用于微量抗原的检测。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  标本固定后,PBS洗涤;

        2.  1 %H2O2(或1 %H2O2甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10~20 分钟;

        3.  PBS洗2×3 分钟;

        4.  正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20 分钟;

        5.  滴加一抗,室温1 小时或4 ℃过夜;

        6.  PBS洗3×3 分钟;

        7.  滴加二抗,室温30 分钟;

        8.  PBS洗3×3 分钟;

        9.  加PAP复合物,室温60 分钟;

        10.  PBS洗涤3×3 分钟;

        11.  二次加酶标二抗;

        12.  PBS洗;

        13.  二次加PAP;

        14.  PBS洗;

        15.  0.04 %DAB+0.03 %H2O2显色5~10 分钟;

        16.  苏木素复染核,封片,镜检。
         

        来源:丁香实验

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