免疫酶测定，大肠杆菌蛋白残留检测试剂盒

免疫酶测定，大肠杆菌蛋白残留检测试剂盒

本试剂盒用于检测通过大肠杆菌重组表达的生产产品中是否存在大肠杆菌宿主细胞蛋白污染。本试剂盒仅供研究和生产使用，不适用于人体或动物的诊断用途。

大肠杆菌试验是一种双位点免疫酶测定法。含有大肠杆菌HCP的样品与辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗E抗体发生反应。在涂有亲和纯化捕获抗大肠杆菌抗体的微量滴定板上同时进行大肠杆菌抗体的检测。免疫反应形成了固相抗体与酶标记抗体的夹心复合物。随后，微量滴定板被清洗以去除未结合的反应物。接着，底物(TMB)被加入并发生反应。通过微量滴定板读数器读取水解底物的量，该量与大肠杆菌HCPs的浓度成正比。

在大肠杆菌中进行重组表达是一种相对简单且成本效益高的方法，用于生产某些蛋白质和pDNA。产品中的许多被设计用于在人类和动物中作为治疗剂使用，因此必须高度纯化。这些产品的制造和纯化过程存在被大肠杆菌的宿细胞蛋白（HCPs）污染的潜在风险。这种污染可能会降低治疗剂的疗效，并导致不良的毒性或免疫反应，因此有必要将HCPs污染降低到实际水平。
这种易于使用、高度敏感、客观和半定量的ELISA是一种强大的方法，有助于优化纯化过程开发、过程控制、常规质量控制和释放测试。这个试剂盒在某种意义上是“通用的”，因为它旨在与可能污染产品的几乎所有HCPs发生反应，而与纯化过程无关。这些是通过使用来自各种菌株的大肠杆菌混合裂解液进行生成和亲和纯化的。这种相对温和的裂解程序旨在获得在初始产品回收步骤中遇到的HCPs，例如当产品分泌时澄清培养上清，或在渗透压冲击或温和的洗涤剂和机械破坏后，以获得包涵体和其他细胞内。
这个试剂盒中的抗体通过抗体亲和萃取和质谱进行了表征，证明了与大多数HCPs的反应性。在生成这些抗体时使用了特殊，以确保低分子量和低免疫原性污染物以及高分子量成分的代表性。因此，这个试剂盒可以用作过程开发工具，以监测最佳的宿主细胞去除，以及在常规最终产品放行测试中使用。 由于抗体的灵敏度和广泛的反应性，这个通用试剂盒已被成功地验证许多不同产品中最终产品HCP的测试。

实验前请按照说明书操作