蛋白质实验

批量层析法简单快速，适用于对蛋白质分辨率要求不高的情况，也是浓缩蛋白质的有效手段。来源：《蛋白质技术手册》

毛细管电泳的主要特点是柱效高（N＞105～106）、分析时间短，所用样品量和试剂消耗少，操作模式多，更容易改变背景电解质，在线检测和自动化，使其成为同 HPLC 互补的分析技术，在生命科学领域显示出很好的应用前景。对肽和蛋白质的分析已经从对标准样品混合物的初步优化研究朝着应用方向发展，如定量测定重组蛋白质及其污染物，CE／MS 用于蛋白质的表征，CE-免疫分析，配体-生物分子结合研究以及酶活性分析

非变性凝胶电泳，也称为天然凝胶电泳。在凝胶中蛋白质的分离取决于它所带电荷及分子大小。按丙烯酰胺凝胶孔径大小去筛分不同尺寸蛋白质的同时，在分离胶酸性 pH 条件下高电荷的蛋白质的泳动速度会更快。这种方法可以区分仅有一个电荷单位差别的分子。与 SDS-PAGE 电泳相比，非变性凝胶大大降低了蛋白质变性发生的机率。来源：《蛋白质技术手册》

在本方案中，用重组病毒储液感染 Sf 9 细胞，在感染后 2～3 天分析。分析方案依赖于表达蛋白的天然特性。本方案仅提供一些建议步骤，但不可能包括全部。根据表达蛋白的不同特性和已有的检测试剂，筛选步骤可做相应的改变。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

本次介绍的两种蛋白质浓缩的方法，是用酸和有机溶剂沉淀的方法，此法常常导致蛋白质变性。变性的蛋白质溶解度降低，能够通过离心在沉淀中使其复性。来源：《蛋白质技术手册》

斑点滤膜结合法是一种初步测定蛋白质含量的快速方法。此法尤其适用于密度梯度离心或柱层析中筛选有用的组分。也可用于指示蛋白峰的存在，以减少进一步进行蛋白定量的样品数。来源：《蛋白质技术手册》

Lowry 法是标准、快速的蛋白质定量检测方法，已得到广泛应用在检测之前可通过蛋白质沉淀将干扰物质去除。来源：《蛋白质技术手册》

虽然包涵体是表达蛋白非天然形式的混合物，但是其肽链本身是完整的，或者说一级结构是正确的。从包涵体纯化表达蛋白的一个优点是包涵体易于与细胞其他成分分离。一般的水溶液很难溶解包涵体，只有在变性剂（如盐酸胍、脲）溶液中才能很好溶解。这时，溶解的包涵体蛋白获得完全变性，即除一级结构和共价键保留外，所有的氢键、疏水键全被破坏，疏水侧链完全暴露。然后，在一定条件下除去变性剂促使产物蛋白完成正确的蛋白折叠过程，

为了纯化细胞蛋白质，采用有效的方法进行细胞破碎和固液分离是必要的。它是全过程的第一步，通常是将处于细胞不同位置的待纯化蛋白释放出来，溶入已知成分的溶液内。该步骤是目的蛋白初级分离纯化阶段的重要环节，它直接影响产物的回收率，也可能影响产物的纯度。来源：《蛋白质技术手册》

使用基因融合表达系统在大肠杆菌中表达外源基因已越来越受欢迎。其原因在很大程度上归因于融合系统能够产生大量的可溶性的融合蛋白。谷胱甘肽转移酶以及硫氧还蛋白均被证实能非常成功地生产正确折叠、有生物活性的蛋白质。其中每一种都备有方便的纯化方法，可将融合蛋白与细胞污染物分开。所产生的蛋白质适用于进行其生物学活性或（和）相互作用的研究。随着融合表达方法的普遍应用，将 N 端的携带蛋白部分从 C 端的目的蛋白

使用基因融合表达系统在大肠杆菌中表达外源基因已越来越受欢迎。其原因在很大程度上归因于融合系统能够产生大量的可溶性的融合蛋白。谷胱甘肽转移酶以及硫氧还蛋白均被证实能非常成功地生产正确折叠、有生物活性的蛋白质。其中每一种都备有方便的纯化方法，可将融合蛋白与细胞污染物分开。所产生的蛋白质适用于进行其生物学活性或（和）相互作用的研究。随着融合表达方法的普遍应用，将 N 端的携带蛋白部分从 C 端的目的蛋白

蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

本实验讨论用三磷酸核苷在可渗透细胞和分离的细胞组分体外标记蛋白的策略。这类实验在大多数情况下还是以 [γ-32P] ATP 作为外源性磷酸供体。尽管在特殊情况下[γ-32P] GTP 也能被用于蛋白质标记。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

本实验提供了从将候选杂交瘤克隆接种到 96 孔培养板开始一直到分离出具有所需活性的杂交瘤克隆的步骤。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

对可逆蛋白质磷酸化在调节植物和动物细胞生理过程中起重要作用的认识正不断加深，许多技术都能用于揭示共价结合于蛋白质的磷酸基的存在。用 32P 代谢标记细胞随后分离 32P 标记蛋白质是揭示蛋白质磷酸化的最直接方法。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

通过用序列特异性的蛋白酶进行消化或用位点特异性的化学试剂进行裂解的方法可 以获得更多关于磷酸肽的信息。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》