融合蛋白酶解实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

使用基因融合表达系统在大肠杆菌中表达外源基因已越来越受欢迎。其原因在很大程度上归因于融合系统能够产生大量的可溶性的融合蛋白。谷胱甘肽转移酶以及硫氧还蛋白均被证实能非常成功地生产正确折叠、有生物活性的蛋白质。其中每一种都备有方便的纯化方法，可将融合蛋白与细胞污染物分开。所产生的蛋白质适用于进行其生物学活性或（和）相互作用的研究。随着融合表达方法的普遍应用，将 N 端的携带蛋白部分从 C 端的目的蛋白中裂解出来的能力就显得更加重要。

来源：《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

基本方案用 Xa 因子

1. 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间。反应 1:20 μl 含有 1 μl 200μg /ml Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白反应 2:5 μl 不含 Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白（模拟消化）室温下反应。2. 分别在 2、4、8 和 24 h 取出 5 μl 反应液，加 2 × SDS 样品缓冲液 5μl ，-20℃ 下冻存。3. 在 24 h 时，将 5 μl 反应