蛋白质实验

乳酸脱氢酶存在于一切有糖酵解作用的细胞中, 在NAD+存在下催化乳酸脱氢形成丙酮酸或使丙酮酸还原成乳酸。本实验目的是掌握用琼脂糖凝胶电泳分离LDH 的原理和方法，学习定量测定动物血清中LDH 的各同工酶的相对百分含量。

本实验目的是掌握盐溶法大量制备动物基因组DNA 的基本原理和方法，根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离, 然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白,使核酸释放出来, 再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出, 达到分离提纯的目的。

当DNA 的稀盐溶液加热到80～100 ℃ 时, 双螺旋结构即发生解体, 两条链分开, 形成无规线团。一系列物化性质也发生改变: 260 nm区紫外吸收值增高(增色效应) , 粘度降低, 浮力密度降低等。本实验旨在准确理解DNA 的Tm 值的定义及测定Tm 值的意义，掌握DNA 的Tm 值的测定方法。

在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂沉淀总RNA, 洗涤后得到高质量的RNA。本实验旨在了解和掌握植物总RNA 的分离和纯化方法。

本实验旨在学会甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA 的方法。琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使RNase 变性而不使RNA 变性的, 故采用甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA。

本实验目的是以柱层析的方法进一步纯化蔗糖酶蛋白，利用DEAE 纤维素树脂作为离子交换剂进行柱层析分级分离。

用测定生成还原糖（葡萄糖和果糖）的量来测定蔗糖水解的速度，本实验中，蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5 min，每产生1毫克葡萄糖所需酶量。本实验旨在测定各级分的蛋白质含量及蔗糖酶活性。

等电聚焦（isoelectrofocusing)，缩写为 IEF 或 EF，是 60 年代建立起来的一种蛋白质分离分析手段。30 多年来发展很快，成为当前电泳中具有最高分辨率 的技术。本实验来源「蛋白质电泳实验技术」主编：郭尧君。

固相 pH 梯度等电聚焦（Immobilized pH gradients isoelectric focusing， IPGIEF）是 80 年代建立起来的一种新型等电聚焦技术。它利用一系列具有弱酸或弱碱性质的丙烯酰胺衍生物滴定时，在滴定终点附近形成 pH 梯度并参与丙烯酰胺的共价聚合，从而形成固定的，不随环境电场等条件变化的 pH 梯度。本实验来源「蛋白质电泳实验技术」主编：郭尧君。

本实验介绍包涵体沉淀（σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

大多数蛋白质虽然每毫克能结合大致相同量的染料，但不同蛋白质之间结合染料的能力仍有 10% 或更大的差异。因此，本法所得的数值不是非常准确的，除非你能用相同的蛋白质作标准来测定蛋白浓度。不过，一般说来，CBB 染色要比银染准确得多。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

蛋白质纯度的一种较为简单而有效的量度是通过测定经纯化的蛋白质的紫外 (UV）光谱得到的。即使十二烷基硫酸钠（SDS) 凝胶电泳分析表明没有杂蛋白存在, 但蛋白质也可能会含有混杂的核酸。核酸量的粗略估计可由 280nm 与 260nm 的吸收比得到。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

Scopes 发表了一种测定蛋白质消光系数（E) 的简便方法（Scopes,1974)。此法基于如下事实，即尽管蛋白质在 205nm 处的吸收大部分是由肽键造成的，但仍有一些吸收取决于其中的氨基酸。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍透析法除N- 十二烷基肌氨酸钠需要多少时间。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

按所用小型平板凝胶装置调整溶液体积，胶板大小约在 8X10X0.15 cm。在此大小范围内有几种形式可以利用。制胶的装置有玻璃板、塑料隔条（通常厚度为 0.1~0.2 cm) 和铸胶时成孔用的 Teflon 梳子。下面逐步示教 SDS-PAGE 的操作程序。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

活体免疫染色可用于检测改造的痘苗病毒Ankara （MVA），也可用于鉴定细胞表面或在细胞质中表达的蛋白质。当然也适用于标准痘苗病毒株。来源《精编分子生物学实验指南（第五版）》

本实验介绍了应用与谷胱甘肽-S-转移酶融合的蛋白质（GST 融合蛋白）来亲和纯化其他蛋白质，又称 GST 共结合纯化方法。这种共结合技术可用来补充评估蛋白质-蛋白质相互作用的其他方法：体外检测方法，如电泳迁移率变动分析（EM- SA） 或免疫共沉淀； 或体内检测方法，如双杂交相互作用阱和以泛素为基础的脱落蛋白感应器。来源《精编分子生物学实验指南（第五版）》

使用 Far Western blot 分析蛋白质相互作用时，目的蛋白固定在一个固体支持膜上，然后用非抗体蛋白探测。 Far Western blot 能够用于识别复杂的蛋白复合物中蛋白质的特异性相互作用。来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：《蛋白质组学：从序列到功能》