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        GST 融合蛋白的亲和纯化实验

        实验分类:

        蛋白质实验

        最新修订时间:

        简介

        本实验介绍了应用与谷胱甘肽-S-转移酶融合的蛋白质(GST 融合蛋白)来亲和纯化其他蛋白质,又称 GST 共结合纯化方法。这种共结合技术可用来补充评估蛋白质-蛋白质相互作用的其他方法:体外检测方法,如电泳迁移率变动分析(EM- SA) 或免疫共沉淀; 或体内检测方法,如双杂交相互作用阱和以泛素为基础的脱落蛋白感应器。


        来源《精编分子生物学实验指南(第五版)》


        来源:丁香实验

        操作方法

        GST 共结合纯化法

        1. E.coli 可溶性蛋白抽提物放置在冰上解冻。2. 每个反应取 500μl 解冻的 E.coli 提取物于 4℃,175000 g (使用 Beckman TLA-100 转子为 70000r/min)离心 30 min。3. 转移上清液(不小于 400 μl)到 2 个试管中,每管 200 μl,并冰浴保存。4. 在一支含 200 μl 步骤 3 获得的上清液试管中加入 1~5 μl [3

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