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- 提供商:
杭州舒桐生物科技有限公司
- 服务名称:
慢病毒感染稳定细胞株构建
- 规格:
一套
- 能将外源基因有效整合入宿主染色体,外源基因表达水平较高、表达稳定;
- 广泛的宿主,可感染分裂和不分裂的细胞,几乎可以感染所有类型的细胞,特别适合质粒载体转染效率低的细胞;
- 适用范围广,可用于体外细胞系和活体动物模型,研究基因和RNAi等;
- 转导效率高,目的基因整合到宿主细胞基因组的概率大大增加。
| 周期 | |
| 慢病毒感染稳定多克隆细胞株构建 | 1-2个月 |
| 慢病毒感染稳定单克隆细胞株构建 | 2-3个月 |
- 客户提供目的基因的序列,如果提供模板,请告知载体、酶切稳点等信息;
- 序列过长可能影响病毒滴度;
- 目的蛋白的功能验证另外收费。
- 稳转细胞株冻存细胞2支;
- 实验测序数据;
- 详细的实验结题报告(包括实验步骤,引物信息,实验结果等)
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文献和实验用慢病毒筛选稳定细胞株,以G418筛选方法为例,筛选出稳定整合Neomycin抗性基因的细胞系。 A 、 G418 抗生素最优浓度筛选 每种细胞对抗生素的敏感性不同,因此,准备建立稳定细胞系之前,需要确定能够在10-14天杀死细胞的最佳浓度。 方法如下 : 1、将细胞稀释到1000个细胞/mL,接种到24孔板,每孔1ml。 2、接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选。3、每隔3天跟换1次培养液,保持G418浓度不变。 4、选择出
细胞治疗 ③ 免疫原性低:直接注射活体组织不易造成免疫反应,适用于动物实验 5.慢病毒载体应用 5.1 体外感染细胞 慢病毒载体能够有效地感染培养的肿瘤细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元、内皮细胞、干细胞等多种类型原代细胞和大部分细胞系。慢病毒的感染具有整合特性,能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上,因而可以达到持久性表达,从而构建稳定细胞株,用于基因的细胞功能研究。 体外使用慢病毒感染细胞需要注意,由于每种细胞对慢病毒的敏感性不同,有的容易感染,有的比较难,同时每种慢病毒载体荧光强度也有差异
wj1989113 最近一直在做慢病毒载体,用的是第二代的三质粒系统,目的片段是一个肝细胞的转录因子。载体构建好之后,包装了一批病毒。然后拿慢病毒感染肝癌细胞株3B和Huh7细胞,想通过PCR和Western验证病毒的表达情况。出现了一些问题: 1、每次拿慢病毒感染肝癌细胞株,荧光都很亮,但是做PCR或者Western之后,加对照病毒GFP组的细胞和目的病毒无差异。(条带都较亮)尤其是Western,几乎没有差异。 2、感染
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