- ￥344
- LABLEAD
- 北京
- LH0201-1ML
- 2025年12月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 供应商：
LABLEAD
- 规格：
1ml
储存条件：-20℃保存2年。短时间（1个月内）使用可以置4 °C。
产品说明
本产品包含Lab longHF DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。使用时只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。为多种采先进基因工程改造而来的超保真酶添加延伸因子混合而成，极大的提高了扩增长度、扩增速度、保真性和产量。该产品是长片段超保真快速扩增的产品。本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR产物为平末端，不需要加A头。
产品特点
●扩增速度快：延伸速度可以达到3-4kb/min，是pfu的6-8倍。
●扩增产量高：一般PCR产物量比传统pfu产量高50%-100%。
●优异保真性：保真度是taq的54倍以上。一般随机挑一个菌测序便是正确无突变菌落。
●扩增长度长：以复杂基因组DNA为模板适合扩增不超过10kb左右的产物，以简单基因组、质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增不超过15kb左右的产物。
建议PCR 体系设置
| Component | 25 μl Reaction | 50 μl Reaction | Final Concentration |
| 2x Lab longHF PCR mix | 12.5 μl | 25 μl | 1 × |
| Forward Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
| Reverse Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
| Template DNA | as required | as required | |
| ddH2O | up to 25 μl | up to 50 μl |
参考模板用量（50 μl反应体系）：
质粒：0.1-10ng；细菌基因组：10-100ng；人类基因组：50-150ng；cDNA：1-5μl from RT reaction。
建议PCR循环条件：
| Step | Temperature | Time | Cycle Number |
| Initial denaturation | 95oC | 3 minutes | |
| Denaturation | 95oC | 10 seconds | 30 cycles |
| Annealing | 55oC | 10-15 seconds | |
| Extension | 72oC | 15-25 seconds / kb (见注1) | |
| Final Extension | 72oC | 2-5 minutes | |
| 4-8oC | Hold |
注意事项
1、本品扩增速度快， 质粒和简单基因组等简单模板可以采用15-20秒/kb；复杂模板如人类基因组可以采用25-30秒/kb。
2、如果电泳发现主带上下拖尾模糊现象，或者泳道出现从上样孔拖下来的涂抹带现象，一般提示延伸时间过长，梯度缩短延伸时间（建议10-15秒/kb为梯度减少延伸时间）直到获得满意结果。
3、对于GC含量很高的模板，预变性和变性温度可以提高到98 oC。该产品耐热性强，98 oC对本品的活性无改变。
4、如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%-8%，按照1%梯度增加摸索zui佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7 M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）
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文献和实验μL 体系 2× MasterMix 25 μL 上游 Primer （ 10 μM 1-5 μL 下游 Primer （ 10 μM ） 1-5 μL 模板 lamid DNA ～ 50 ng genomic DNA ～ 1000 ng cDNA ～ 500 ng 粗提液 ～ 2 μL 灭菌蒸馏水至 50 μL PCR 扩增实例： 一、plasmid DNA 扩增 1．提取的质粒 DNA 扩增 以pUC19 质粒为模板扩增 100，250，500
x BSA.Mix well. 14.Split the samples into (+)and (-)antibody samples of equal volume,making sure you choose an amount that will allow you to withhold 10% of the IP sample volume for your “10% input” samples that you need later for PCR,as well as having
章）。如果使用GSP，确保引物的Tm值与预计的保温温度相同。不要在高于60℃时使用oligo(dT)和随机引物。随机引物需要在增加到60℃前在25℃保温10分钟。除了使用较高的逆转录温度外，还可以通过直接将RNA/引物混合物从65℃变性温度转到逆转录保温温度，并加入预热的2×的反应混合物提高特异性（cDNA热启动合成）。这种方法有助于防止较低温度时所发生的分子间碱基配对。使用PCR仪可以简化RT-PCR所需的多种温度切换。 图6 温度对不同模板的影响 使用
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