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20T
货号:P1027-20T
存储条件:常温,6个月有效
产品简介:
蛋白快速银染试剂盒是一种快速的可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒,该试剂盒含有增敏步骤,可明显降低背景。其优点还在于:1、操作简单快速;2、用于2D凝胶的银染,并可进行后续的质谱检测;3、目的条带清晰:4、不含甲醇。
蛋白快速银染试剂盒操作速度更快。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
| 名称 | 规格 | 存储条件 |
| 试剂A:Silver Stain Sensitizer(500x) | 2x1ml | 常温 |
| 试剂(B): Silver Stain (100 x) | 10ml | 常温,避光 |
| 试剂(C):Silver Stain Developer(5x) | 2x100ml | 常温,避光 |
| 试剂(D):Silver Stain Stop Buffer(10x ) | 100ml | 常温 |
自备材料:
1、水平摇床或侧摆摇床
2、去离子水(超纯)
3、乙醇、冰乙酸
操作步骤(仅供参考):
1、准备工作:以下操作以 8.5x5.5cm、 厚度为 1.0mm 的凝胶为例,以凝胶全部浸没到溶液为准,一股用量是 25ml,对于凝胶体积较大的,各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程应在摇床上进行,摇床转速控制在 60~70rpm。提前配制固定液即按无水乙醇冰乙酸;去离子水=5-1:4的比例配制。提前配制洗涤液,即按无水乙醇;去离子水=1:4的比例配制。
2、水洗:电泳结束后,取凝胶放入去离子水中清洗2次,每次5min.
3、固定:取凝胶放入50~100ml 固定液中,在摇床上室温摇动 15~20min,重复固定步骤1次。
4、洗脱:取凝胶放入洗涤液中清洗2 次,每次 5min。
5、水洗:去离子水清洗凝胶2次,每次 5min。
6、增敏:配制银染增敏工作液,即取 Silver Stain Sensitizer(500 x)0.1ml 加入到 50ml去离子水中,混匀,即为 1×Silver Stain Sensitizer,一般应 2h 内用完。室温下用 1xSilver Stain Sensitizer 育凝胶 2min,立即用去离子水清洗凝胶2次,每次1min。
7、银染:配制银染工作液,即取Silver Stain(100 x)0.5m1 加入到50ml 去离子水中,混匀,即得 1× Silver Stain,一般应 2h 内用完。 取凝胶入 1 xSilver Stain, 在摇床上室温摇动 10~20min。
8、水洗:弃液,在摇床上用去离子水清洗凝胶 2 次,每次 30s, 摇动速度在 60~ 70rpm总的水洗时间应控制在 1.5min 内。
9、显影:配制银染显影工作液,即取 Silver Stain Developer(5x)10ml 加入到 40ml 去离子水中,混匀,即为 1x Siver Stain Developer,一般应30min内用完。清洗凝胶后,立即置于 1x Silver Stain Developer 中,室温聯育2~10min,直至蛋白条带清晰可见。
般显色305/后就会出现棕色沅淀,继续显影 2-3min, 亦可延长至 5min 以上,如果显影效果不佳,可重新更换 1xSilver Stain Developer继续显影。
注意事项
1、背景过深:①显色时间过长;②洗涤不充分:③凝胶中残留物质未去除干净;④去离子水的纯度过低!
2、蛋白条带较浅:①蛋白的半胱氨酸含量过低:②银染后水洗时间过长:③蛋白量较低;④固定后的洗涤时间不够,导致乙酸残留。
3、凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹:①凝胶没有被充分漫没,应加入足量溶液:②容器没有清洗干净;③凝胶接触金厲物质;④指纹或其他压迹。
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