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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
4度避光储存
- 保质期:
一年
- 英文名:
//
- 库存:
大量
- 供应商:
北京普利莱基因技术有限公司
- 规格:
100ml
适用于P1000 P1010 P1020 P1030 P1050 P1052 P1060 W0001
描述:ECL发光液可用于直接或间接检测与辣根过氧化物酶HRP关联的蛋白或核酸底物。普利莱是国内最早推出ECL化学发光液的民族品牌,使用普利莱ECL化学发光产品发表的SCI论文文章影响因子超过5000分。经过不断研发升级,普利莱目前拥有中、强、极强全系列发光液,与国外进口品牌相比,品质好,价格优,不论高丰度蛋白、低丰度蛋白,总有一款适合您!
用途:适于全自动化学发光成像系统和HRP标记探针的核酸杂交。
储存:4 oC密封避光保存 两年有效
安全性:无特殊毒性,按普通化学品处理。
使用方法:
- 常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。核酸杂交膜用HRP标记探针杂交,洗膜。
- 洗涤膜上的HRP标记二抗时,配制新鲜发光工作液:分别取等体积的溶液A和B混合,放置使之升到室温。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
- 用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入并与发光工作液(0.125ml发光工作液/cm2膜)充分接触。准备立即使用全自动化学发光成像系统扫描。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利于反应进行,也会导致膜上条带曝光不均,明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
- 用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
- 全自动化学发光成像系统扫描。
- 步骤1-5可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低。戴手套可以避免在膜上留下手印。
- 蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。
- 发光工作液孵育约1分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可全自动化学发光成像系统扫描。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光。
- 由于不同发光液的灵敏度,选择合适的抗体稀释浓度,进行孵育!
- 某些市售保鲜膜包裹印迹膜时会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜,例如“克林莱”牌子保鲜膜。
- 暗室曝光时,使用肉眼可见的荧光-放射自显影曝光标签(#P2010)可帮助确定胶片上条带的准确位置和大小。
- NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。
SuperEnhanced chemiluminescence detection reagents were purchased from Applygen Technologies Inc. (Beijing, China);
The protein bands were visualized by enhanced chemiluminescence detection reagents (Applygen Technologies Inc., Beijing, China);
The blots were washed and then developed by use of a SuperEnhanced chemiluminescence detection kit (Applygen Technologies Inc., Beijing, China), The protein bands were visualized after exposure of the membranes to Kodak X-ray film.
发表中文论文时可标明 (SuperECL Plus超敏发光液购自北京普利莱基因技术公司)。
以下仅仅列举数篇使用北京普利莱基因技术公司SuperECL Plus超敏发光液的SCI研究论文:
1. Xia R, Wang J, Liu C, et al. The Plant Cell, 2006, 18: 85-103.
2. He J, Jiang H, Tansey JT, et al. Biochimica Biophysica Acta 2006, 1761: 247-255.
3. Zhang L, Chen J, Ke Y, et al. Oncology Reports, 2005, 14: 1615-1619.
4. Wang H, Qian H, Yu J, et al. Cancer Biology & Therapy 2006, 5: 380-385.
5. Luo M, Shen X, Zhang Y, et al. Cancer Research, 2006, 66: 11690-11699.
6. Jiang H, He J, Tang C, et al. Biochimica Biophysica Acta, 2007, 1771: 66–74
7. Ren T, He J, Jiang H, et al. Journal of Molecular Endocrinology. 2006, 37: 175-183.
8. Qian L, Zhang Z, Shi M, et al. Journal Histochemistry and Cell Biology. 2006, 126: 593-601
9. Pan S, Jiang W, Wu Y, et al. Journal Basic Research in Cardiology. 2006, 101: 193-203
10. Wang C and Liu T. Functional Plant Biology, 2006, 33: 697-702.
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文献和实验。SuperECL Plus 超敏发光液,价格低廉,灵敏度大大高出Amersham 和Santa Cruz 公司同类ECL 产品100 倍以上,也明显高出Pierce 的SuperSignal West Pico 化学发光系统数倍,但背景更干净,发光时间持久,可以长达10 小时以上。 特别适用于丰度极低而一般ECL 系统难于检测的目的蛋白。特点如下: ж 灵敏度极高,可检测10-100 fg 抗原。 ж 高信噪比,背境干净。 ж 发光迅速。 ж 发光持续12小时以上。 ж 可在日光灯下进行发光操作
Western Blot 实验 通过SDS-PAGE胶将不同的分子量的蛋白分离开,将目标蛋白转移到PVDF膜上,再利用抗原抗体的特异性结合,用特异性的一抗结合目标蛋白,用HRP标记的二抗结合一抗,再加以ECL发光液显色,检测目的蛋白在不同处理的样本中表达量的高低变化 服务优势及实验服务流程: 1、利用高性能试剂配合高通量全自动western blot机,提供超高灵敏性的western blot实验服务。超高灵敏度最低至15飞克抗原。 2、一抗的寄送需要泡沫盒加冰袋低温即送
漂洗膜后再浸洗三次,每次5-10min。 发光鉴定 Western blot检测系统中常用交联酶两大家族就是辣根过氧化物酶HRP-ECL或碱性磷酸酶AP-NBT/BICP。碱性磷酸酶很早就被用于检测系统-包括固定化抗原(WB)监测和核酸检测。但是做AP实验经常会遇到显色背景偏高的问题,所以就WB本身来说偏爱HRP的要比AP多。AP显色底物的生成物主要是蓝紫色,成像好,容易拍照。但是背景也偏高,整个显色过程更有技术性,有许多个人技巧在里面。如今由于HRP系统的化学发光系统已经不断
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