Western Blot 实验试剂选购指南
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(一)蛋白质电泳
1.请参照常规电泳操作.
2.分子量标准:
可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时,要注意其优点和缺点:
优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态; 可指示转印中蛋白质的转印效率.
缺点: 染料影响蛋白质移动速度;分子量测定略欠精确;影响蛋白质与膜的结合力.
购买信息:
中范围蛋白质分子量标准(14.3-97.4KD) | V5235S | 200μg | 国产 | 80元 |
分子量大小:（14.3、21.5、31、40、42.7、55、66.2、97.4KD） | ||||
中范围蛋白质分子量标准(24-97KD) | MTB087-1 | 20次 | 国产 | 80元 |
分子量大小:（24、36、53、66、97KD） | ||||
低范围蛋白质分子量标准（6.5-66KD） | M3913-1 | 20次 | Sigma | 280元 |
低范围蛋白质分子量标准（6.5-66KD） | M3913-1 | 5×20次 | Sigma | 1198元 |
分子量大小:（6.5、20、24、29、36、45、66KD） | ||||
高范围蛋白质分子量标准（36-205KD) | M3788-1 | 20次 | Sigma | 280元 |
高范围蛋白质分子量标准（36-205KD) | M3788-1 | 5×20次 | Sigma | 1198元 |
分子量大小:（36、45、55、66、84、97、116、205KD） | ||||
宽范围蛋白质分子量标准（6.5-205KD) | M4038-1 | 20次 | Sigma | 280元 |
宽范围蛋白质分子量标准（6.5-205KD) | M4038-1 | 5×20次 | Sigma | 1266元 |
分子量大小:（6.5、14.2、20、24、29、36、45、55、66KD） | ||||
预染的低范围蛋白质分子量标准(18-80KD) | 20次 | 自产 | 320元 | |
预染的低范围蛋白质分子量标准(18-80KD) | 50次 | 自产 | 680元 | |
分子量大小: 80, 60, 39, 23, 18 kDa | ||||
预染的中高范围蛋白质分子量标准(20-210KD) | 20次 | 自产 | 320元 | |
预染的中高范围蛋白质分子量标准(20-210KD) | 50次 | 自产 | 680元 | |
分子量大小:210, 140, 106/102, 80, 52, 20 kDa | ||||
预染的中高范围蛋白质分子量标准(18.3-210KD) | 26681 | 48次 | Pierce | 1214元 |
(二)蛋白质转印
a)膜的选择:主要采用 NC膜和PVDF膜,其比较如下:
NC膜 | PVDF膜 | |
物理强度 | 差 | 好 |
蛋白质结合能力 | 80-100ug/cm2 | 100-200ug/cm2 |
溶剂耐受力 | 无 | 有 |
考马斯亮兰染色 | 否 | 可以 |
ECL检测 | 稍差 | 可以 |
快速免疫检测 | 否 | 可以 |
SDS存在下蛋白质结合 | 差 | 好 |
质谱分析 | 否 | 可以 |
(尼龙膜和NC膜的特点相似,主要用于核酸杂交)
b)膜的大小: 请根据胶的面积来确定.
c)膜的孔径: 0.45μm适用一般蛋白质.0.2μm适用小分子蛋白质.
购买信息:
66485 | 硝酸纤维素膜,0.45um,30cmX3m/卷 | 美国Gelman | 1395元/卷 |
硝酸纤维素膜,0.45um,20cmX20cm | 美国Gelman | 80元/张 | |
硝酸纤维素膜,0.45um,20cmX20cm | 国产 | 30元/张 | |
60207 | 尼龙膜, 0.45um,30cmX3m/卷 | 美国Gelman | 2310元/卷 |
尼龙膜, 0.45um,20cmX15cm | 美国Gelman | 90元/张 | |
尼龙膜, 0.45um,直径100mm,50张/盒 | 国产 | 260元/盒 | |
66543 | PVDF膜, 0.45um,30cmX3m/卷 | 美国Gelman | 1690元/卷 |
PVDF膜, 0.45um, 直径100mm,50张/盒 | 国产 | 260元/盒 |
(三)蛋白质的显示(大部分实验不需要进行此步操作)
蛋白质染色的染料有很多种,各种的特点均不一样.
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蛋白质灵敏度
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影响免疫检测
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Ponceau-S Red丽春红
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5ug
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无
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快绿Fc
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5ug
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无
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Sypro Rose
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1-2ng
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无
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氨基黑10B
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1ug
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有
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考马斯亮兰R-250
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500ng
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有
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印度墨
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100ng
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有
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胶体金
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4ng
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有
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Ponceau-S Red丽春红
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Sigma原装
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10g
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182元
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快绿Fc
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Amresco分装
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25g
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258元
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氨基黑10B
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Sigma分装
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10g
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168元
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考马斯亮兰R-250
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Amresco分装
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10g
|
168元
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蛋白银染试剂盒
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自产MTB083-1
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10次
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188元
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SDS-PAGE蛋白快速染色试剂
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自产
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25次
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100元
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Western Blot 膜可逆染色剂
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自产
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100ml
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100元
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有各种不同的免疫检测方法.请注意选择.方法不同,则所需的试剂也不同.如需方便,可选择完整的试剂盒.
A.封闭膜:
这一步会影响结果的成败和背景的强度.常用封闭剂为BSA和Tween20.脱脂干奶粉不适合用于糖蛋白和生物素标记抗体.
购买信息:
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牛血清白蛋白组份五BSA
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Amresco分装
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25g
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280元
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Tween 20
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Amresco分装
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500ml
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150元
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Western Blot 膜封闭剂
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自产
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100ml
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100元
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B.一抗: 根据目的蛋白质选择.单抗或多抗均可.注意已变性蛋白质无法检测,必须采用非变性胶电泳.我司有 R&D,Genex,Santa Cruz等公司的原装抗体或进口分装抗体.具体请参见免疫学部分产品----第一抗体.
C.标记二抗: 根据一抗的来源选择二抗.
购买信息: 请参见免疫学部分试剂---各种标记抗体
D.底物系统: 采用常规底物或化学发光底物.
(1)显色法: 常用底物为BCIP/NBT或DAB .此法简单,但灵敏度不高,并难以从膜上去除.
(2)化学发光法: 目前比较常用的方法.灵敏度较高,检测时可采用X光胶片或CCD成像系统.
不同显色方法产品比较如下:
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厂家
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灵敏度
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方法
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SuperSignalâ West Pico 化学发光底物
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美国Pierce
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皮克级
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化学发光法
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SuperSignalâ West Dura 持久性化学发光底物
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美国Pierce
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低飞克级
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化学发光法
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SuperSignalâ West Femto 高灵敏度化学发光底物
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美国Pierce
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飞克级
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化学发光法
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ECL Kit
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Amersham
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飞克级
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化学发光法
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BCIP/NBT (AP酶)
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100pg
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显色法
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DAB (HRP酶)
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100pg
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显色法
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SuperECL Plus Western Blotting 超敏发光液
采用独特的发光底物系统，是世界上最灵敏的ECL Western Blot 化学发光试剂。用于Western Blotting 条带的荧光发光，检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP 的抗体及其关联的抗原。由两种溶液组成，使用前混合。SuperECL Plus 超敏发光液，价格低廉，灵敏度大大高出Amersham 和Santa Cruz 公司同类ECL 产品100 倍以上，也明显高出Pierce 的SuperSignal West Pico 化学发光系统数倍，但背景更干净，发光时间持久，可以长达10 小时以上。
特别适用于丰度极低而一般ECL 系统难于检测的目的蛋白。
特点如下：
ж 灵敏度极高，可检测10-100 fg 抗原。
ж 高信噪比，背境干净。
ж 发光迅速。
ж 发光持续12小时以上。
ж 可在日光灯下进行发光操作。
ж 节省抗体(一抗1:2000－1:6000；二抗1:4000－1:10000)。
ж 储存条件：4℃避光储存一年，偶尔室温放置数周不影响质量。
购买信息
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产品名称
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规格
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编号
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价格
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SuperECL Plus Western Blotting 超敏发光液
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10ml
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P1010-10
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138
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25ml
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P1010-25
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266
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100ml
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P1010-100
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880
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美国Pierce公司化 学 发 光 底 物 系 列
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SuperSignalâ 底物家族提供一系列的底物，适合免疫印迹的多种灵敏度要求。
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SuperSignal@ West Pico 化学发光底物
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特征
优点
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经济：比任何其它化学发光底物产品花费更少。
更长发光时间：强光发射超过一个工作日，获得你想要曝光次数。
高强度：信号比其它基于发光胺的系统强两倍。
皮克级灵敏性：高度灵敏性可快速显色较宽水平范围内的蛋白质。
优良的稳定性：24小时工作溶液稳定性；在运输条件环境下至少可稳定1年。
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SuperSignal@ West Dura 持久性化学发光底物
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特征
优点
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24小时发光时间：比任何其它改良的HRP化学发光底物提供的要长10倍；为发表质量的印迹提供更多的曝光
极好的灵敏度：具前所未有的10-15 克级灵敏度
节省抗体：使用Super Signal â West Dura 伸展持续期底物比用其它化学发光底物，抗体稀释度可高得多。
立即产生强烈信号，易被胶片或化学发光检测系统检测
工作浓度至少稳定24小时；试剂盒在运输条件下可稳定至少一年
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SuperSignal@ West Femto 最高灵敏度化学发光底物
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特征
优点
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释放由化学发光系统产生的最强信号；使胶片或图象仪系统成像更容易达到可能检测蛋白质的最低限：10-15 克
经济：使宝贵的一抗稀释度可达1/100,000
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Lumi-PhosTM West Blotting 化学发光底物
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PIERCE 基于碱性磷酸酶检测系统的化学发光底物，其同时具有两个特色：高强度信号和较低的背景。
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目录号
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产品名称
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包装
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价格
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SuperSignalâ West Pico化学发光底物
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34080
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SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
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500ml
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2178
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34077
|
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
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100ml
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647
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34079
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SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate Trial Kit
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50ml
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383
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SuperSignalâ West Dura持久性化学发光底物
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34075
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SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate
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100ml
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3643
|
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37071
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SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate Trial Kit
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20ml
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805
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SuperSignalâ West Femto最高灵敏度化学发光底物
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34095
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SuperSignal® West Femto Maximum Sensitivity Substrate
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100ml
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3828
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34094
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SuperSignal® West Femto Maximum Substrate Trial kit
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20ml
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950
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我们开发了此步免疫检测的完整的试剂盒,即HRP标记的二抗检测系统(含封闭液,洗液,底物,HRP/亲和素-二抗),您只需准备好一抗,并选择和一抗动物来源相应的试剂盒就可以.对于实验来说,采用完整的试剂盒可以避免各种试剂的不匹比而带来的结果不理想.
Western Blotting DAB显色法检测试剂盒
试剂盒的内容：
（1）封闭试剂：10g蛋白质干粉2包。
（2）浓缩抗体稀释液：20ml×2瓶，为10倍浓缩液。
（3）过氧化物酶标记二抗。1ml。效价1：200―400
（4）DAB浓缩液10ml(×40倍)
购买信息:
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Western Blotting DAB显色kit（大鼠IgG）
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SA2023
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国产
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盒
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550元
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Western Blotting DAB显色kit（山羊IgG）
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SA2021
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国产
|
盒
|
550元
|
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Western Blotting DAB显色kit（兔IgG）
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SA2022
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国产
|
盒
|
550元
|
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Western Blotting DAB显色kit（小鼠IgG）
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SA2020
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国产
|
盒
|
550元
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SuperSignal West Pico His蛋白Western检测试剂盒
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15168
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Pierce
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盒
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3268元
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CL-Xposure X 光胶片(5”x7”)
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34090
|
Pierce
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100张
|
1054元
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CL-Xposure X 光胶片(8”x10”)
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34091
|
Pierce
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100张
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2121元
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柯达X 光胶片(5”x7”)
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合资
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100张
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200元
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暗盒(5”x7”) 含增感屏
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