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    首页 / 试剂 / 免疫检测 / 化学发光免疫检测 / ECL Prime Western Blotting Detection Reagent

    ECL Prime Western Blotting Detection Reagent

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    ECL Prime Western Blotting Detection Reagent
    价格: ¥1072
    品牌: Cytiva 已认证
    试用品规格: A+B,5ML
    免费试用 优质试用报告提升试用成功率
    试用份额:
    10

    试用倒计时:
    xx xx xx xx秒后结束
    试用说明:
    1、运费: 包邮 ; 包邮; 2、联系时间: 试用活动结束后的7天内; 3、申请要求: 每个实验室只能申请一次; 4、其他说明: 无;
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      • 试用活动结束后,7 天内商家主动联系发货;
      • 试用结束后,请及时提交试用报告;
      • 未提交报告,将降低申请成功几率。
      • 供应商: Cytiva
      试用名额:10个
      试用规格:A+B,5ML
      是否包邮:包邮
      试用申请要求: 每个实验室限申请1次
      其他说明: 注明研究方向



      满减优惠:购买 WB 全线产品实付金额满 5000 减 400、满 10000 减 900、满 20000 减 2000,满30000减3000!

      ECL试剂的最佳选择取决于实验的要求。如果需要高灵敏度或准确的定量,推荐使用Amersham ECL Prime或Amersham ECL Select。由于Amersham ECL Prime和Amersham ECL Select发出的信号非常强,提高了蛋白检出的下限
      • 当使用基于抗体的检测方法时,一抗的质量和来源,以及它对目的蛋白的亲和力,将在确定检测限以及是否存在交叉反应等方面起很大作用。
      • 抗体应始终以厂家建议的浓度使用,下表列出了Amersham  ECL试剂的指导方法。信号一般随抗体浓度增加而增加,但抗体过量也可能导致与膜的非特异性结合。需要花时间来测试不同的抗体浓度

      Amersham ECL Prime 是一种高灵敏的检测试剂,其特点是信号极其稳定,允许重复曝光,在同一次实验中更容易处理多个印迹。信号强意味着Amersham ECL Prime 适合于处理低丰度蛋白质。此外,可以使用高稀释度的一抗和二抗,降低实验的总成本以及降低高背景的风险。

      与其它化学发光试剂相比,Amersham ECL Prime 的性能得以提高,这是由于存在高性能增强剂和催化剂,提高了信号强度、灵敏度和持续时间。Amersham ECL Prime 特别推荐用于定量分析,例如:
      • 需要高灵敏度的应用
      • 蛋白丰度的变化
      • 蛋白质:蛋白相互作用
      • 检测蛋白质异构体
      • 蛋白质降解的评价
      • 翻译后修饰(PTM)

      同时检测低丰度和高丰度蛋白
      Amersham ECL Prime 的性能如图6.5所示,用于检测二倍稀释系列的 IFNα处理的 HeLa 细胞裂解物中的 pSTAT3,该裂解物来自 12.5μg 的总蛋白提取物。注意,灵敏性水平取决于特异性抗体与蛋白的相互作用。


      图1 应用 Amersham ECL Prime 检测 IFNα处理的 HeLa 细胞中的 pSTAT3。注意,蛋白数量是指从细胞裂解液中提取的负载蛋白的总量。pSTAT3 仅包含该总量的一小部分。对照通道含有 6.25μg 未处理细胞的总蛋白。

      Amersham ECL Prime 的另一个优点是信号强,可使用高稀释度抗体(图2)。如果用于检测的抗体量稀少,Amersham ECL Prime 将节约成本。

      此外,推荐配合使用Amersham Hybond PVDF 膜,因为高蛋白结合能力带来高灵敏度。一抗和二抗应分别从1:1000 稀释至1:50,000 和1:50,000 稀释至1:250,000。如果选暗室压片法,Amersham ECL Prime 也与胶片兼容。


      化学发光实验技巧
      • 为了提高信噪比,优化封闭液和抗体浓度,不要使用NaN₃作为缓冲液的防腐剂,因为它是HRP的有效抑制剂。
      • 为了在使用基于ECL的检测时避免染色不均匀,首先将检测溶液混合并倒入干净的容器中。然后将孵好的膜置于检测溶液中,轻轻搅拌以覆盖整个表面。
      • 如果膜要重复使用,把膜放在一个塑料文件袋中,以防止干燥。一定要清除气泡。
      • 在免疫检测过程中或在两次免疫检测之间任何时候,不要让膜干燥。如果膜干燥,任何残留的分子将永久地结合在膜上,不可能对膜上抗体进行剥离。这在使用PVDF膜时尤其重要。
      • 为了实验的可重复性,在使用前将所有试剂恢复至室温。
      • 尽管Amersham ECL, Amersham ECL Prime, 以及Amersham ECL Select 活性较为稳定, 但我们仍建议发光液配好后尽快使用. 如果配好后的发光液需要储存,建议将容器包上锡箔纸,并避光保存。
      • 化学发光信号会逐渐衰减,即便是在ECL检测之后立即分析结果,仍只能得到弱信号:
                    -确保检测试剂没有过期,并已妥善储存;溶液不应在室温下储存或暴露于直射光
                    -确保检测溶液瓶上的盖子没有混用,没有污染溶液
      • 不要交叉污染溶液;使用新的、干净的移液器枪头;如果要进行剥离和二次孵育实验,不要让膜变干
      • 如果你的检测涉及链霉亲和素-生物素-HRP复合物,不要使用脱脂奶粉作为封闭液或稀释剂。链霉亲和素与生物素之间的相互作用可能被牛奶中的内源性生物素抑制,导致信号降低。此外,牛奶可能含有磷酸表位,会干扰磷酸特异性抗体,并导致背景增加。
      • 为了检查ECL发光液是否正常,您可以执行“蓝光测试”。暗室中,在试管里加入1mL的ECL试剂,加入1-3μL HRP偶联二级抗体并充分混合,会发出易见的蓝白光。
       
      温馨提示:不可用于临床治疗。

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    Cytiva(思拓凡)
    • 联系人:

      市场部

    • 所在地区:

      上海市浦东新区华佗路1号

    • 业务范围:

      实验室仪器 / 设备,试剂,细胞库 / 细胞培养,技术服务,耗材

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      经销商,生产厂商

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