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SELECT-m6A修饰定量检
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SELECT(single-base elongation-and ligation-based qPCR amplification method)[1] 检测技术,即单碱基延长和连接的 qPCR 扩增技术,只需三小时就能完成低丰度转录本中单碱基分辨率的 m6A 检测,无需抗体富集就能够针对性地对特定位点进行 m6A 修饰定量,样本间修饰丰度差异分析以及鉴定目标位点是否存在m6A修饰。表观生物将隆重推出多款 SELECT 检测试剂盒以及 SELECT 检测技术服务,填补市场上特定位点 m6A 常规检测技术的空白,协助研究者鉴定 m6A 相关蛋白的作用靶点,深入挖掘 m6A 修饰的作用机制,有望为RNA m6A修饰分子标志物的发现带来新突破。技术应用1. 检测RNA上单位点的m6A修饰2. 检测特定m6A位点的修饰比例3. 鉴定m6A甲基转移酶或去甲基酶的作用靶点技术优势1. 荧光定量PCR进行精确定量,达到单碱基分辨率2. 无需抗体IP,无需同位素标记,降低成本,可操作性高3. 灵敏度高,总RNA所需样本低至1μg 技术服务送样要求1. 总RNA,≥3μg/样本;2. 细胞,≥2.5×105个细胞/样本试剂盒信息
技术流程图
应用示例1.对特定位点的m6A修饰进行定量
图1. 利用系列浓度梯度的标准品RNA制作标准曲线,然后对总RNA中待分析m6A修饰的位点所在转录本进行定量[1]
图2. 利用系列浓度梯度的已知m6A成分标准品制作标准曲线,然后对特定位点上的m6A修饰成分进行定量[1]
2.鉴定m6A修饰相关蛋白(甲基化酶、去甲基化酶、识别蛋白等)的靶点
图3. SELECT分析 lncRNA MALAT1和以及METTL3+/-细胞(对照组)的m6A2515和A2511(input对照)位点,荧光扩增曲线和qPCR CT值柱状图显示lncRNA MALAT1的2515位点是METTL3的一个靶点[1]
参考文献[1] Xiao Y, Wang Y, Tang Q, et al. An Elongation- and Ligation-Based qPCR Amplification Method for the Radiolabeling-Free Detection of Locus-Specific N6 -Methyladenosine Modification. Angew Chem Int Ed Engl. 2018 Dec 3;57(49):15995-16000.
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