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- 上海.上海
- 2026年01月13日
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- 服务名称：
Lentivirus慢病毒介导的siRNA活体实验用病毒液服务
- 规格：
P4274-10MG
技术服务详细描述
Lentivirus 载体的技术特点 |
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本公司使用的慢病毒表达系统，它由三部分组成：
- 慢病毒表达载体
- 慢病毒包装质粒
- 可产生假病毒颗粒的细胞系
慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。
服务流程
对于活体 RNAi实验模型，吉玛公司可以为您生产高质量的病毒液，服务流程如下：
- 根据目的基因相关信息（序列，序列号等），利用高效的设计软件，设计 siRNA序列，针对每条目的基因，我们设计3条siRNA序列，其中1条序列为阴性对照组；
- 根据设计好的 siRNA序列，设计，合成两条互补的短片段的DNA；
- 对合成好的 DNA片段进行稀释，退火，连接到线形化处理过的载体，转化，涂平板，过夜培养；
- 通过 PCR的方法筛选阳性菌落，进行测序，分析测序结果；
- 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的 siRNA病毒穿梭质粒；
- 利用构建好的质粒做转染实验， 48小时后通过实时荧光定量和Western的方法分析目的基因，筛选出一条最有效的siRNA序列；
- 筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞，进行病毒包装和生产，收集病毒液；
- 浓缩、纯化病毒液，测定滴度；
提供高质量的病毒液给客户（对于活体实验，我们提供的病毒基本单位为 1×108 ifu ，这个单位为一只小鼠一次实验的平均用量）
基于慢病毒系统的 RNAi沉默效果
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文献和实验1.慢病毒1.1 慢病毒技术的原理慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA 载体相比。一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。在研究RNAi方面，慢病毒技术是最为
（1）原理 慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构，但也有不同于逆转录病毒的组份和特性，作为基因治疗载体发展起来，最近已用于转基因动物制备。利用慢病毒构建的shRNA/miRNA载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比。一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，lentivirus－shRNA/miRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受
1.慢病毒载体概述 慢病毒载体（Lentivirus）是一类改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒载体，是逆转录病毒的一种，基因组是RNA，其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达，具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。 慢病毒基因组进入细胞后，在细胞浆中反转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生小RNA。慢病毒介导的基因
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