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细胞系/稳转细胞株株构建
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艾柏森(北京)生物科技有限公司
慢病毒构建并包装后,以进行贴壁细胞或悬浮细胞的转染。

具体流程如下:
1. 对慢病毒基因进行改造,即敲除U3端的400bp的特定基因,使其逆转录和整合的能力,但保留产生病毒颗粒必须的蛋白的能力
2. 向上述基因中插入目的基因。与具有包装功能的质粒同时进行对包装细胞的转染。在细胞上清中获得携带目的基因的复制缺陷型慢病毒载体颗粒
3. 使用上述获得的慢病毒颗粒转染目的细胞
4. 根据慢病毒携带的标记基因,转染得到的细胞进行荧光蛋白检测或加入抗生素进行细胞筛选。
5. 荧光性强或者克隆数多的细胞系加以传代培养并保存
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http://www.ebiofield.com/goods-174115.html
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文献和实验这里说的稳转细胞系的构建是指慢病毒转染构建的稳转细胞系,可以构建表达细胞系,也能构建敲降细胞系,经常有人问我什么叫稳转和顺转的区别。瞬转细胞系,一般情况下能够稳定表达最多长一周左右,而稳转细胞系,只要构建成功就能稳定表达,没有时间限制,但是也不是肯定的,一般实验构建的细胞系超过 10 代以后,这个细胞系就有可能不靠谱了。接下来,咱们讲讲稳转细胞系的构建。一般来讲 shRNA 用的是 HIV 病毒,虽然已经经过处理,但是一听这名字也觉得渗人,无论如何保护自己是在实验室永葆青春的基础,所以一定
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