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- 2026年01月06日
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吉玛基因
RT-PCR 服务简介
RT-PCR 检测服务中采用SYBR Green染料法/探针法进行RT-PCR相对定量检测服务，即用已知管家基因做为内参照，根据目的基因和管家基因的相对表达作为定量的最后结果。
样品可提供组织、细胞、RNA、cDNA中的一种,对于提供样本的大致原则如下：组织样本,尽可能提供2×2×2mm3体积或以上,新鲜组织可直接提供，不需处理；对于细胞样本，尽可能提供3×106个细胞左右,加适量Trizol处理即可，确保样品适于RNA抽提。RNA、cDNA含量根据同等细胞数量的细胞抽提和逆转录大致界定。相关情况可以具体协商。样品吉玛最长保存期限为30天，也可根据客户要求在完成实验后即刻销毁或寄回客户。
RT-PCR服务内容
1.RNA提取质量检测电泳图
2.RT-PCR扩增曲线示例（三重复避免系统误差）
3.RT-PCR数据分析示例（计算组内误差）
4.RT-PCR结果柱状图示例（检测干扰效率）
5.靶基因与内参溶解曲线图（检测扩增质量）
6.DNA片段扩增质量检测电泳图
吉玛RT-PCR服务提供的结果展示：RNA提取质量检测电泳图
RT-PCR结果柱状图示例（检测干扰效率，样品包括：NC（阴性对照组）、B(Blank不作处理组)、M（Mock单加转染试剂组）及实验样品组）
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文献和实验随机引物 适用于长的或具有发卡结构的 RNA。适用于 rRNA、mRNA、tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。 Oligo dT 适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA。（原核生物的 RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具PolyA 尾 巴。）由于 Oligo dT 要结合到 PolyA 尾巴上，所以对 RNA 样品的质量要求较高，即使有少量降解也 会使全长 cDNA 合成量大大减少。 基因特异性引物 与模板序列互补
定量RT-PCR （Quantitative RT-PCR）
A = B(1+e) n A=amplified products, B=input templates, n=cycle number, and e=amplification efficiency. Factors affecting amplification efficiency in the RT-PCR process include the efficiency of reverse
性由两个人工合成的引物序列决定。反应分三步： A.变性：通过加热使 DNA 双螺旋的氢键断裂，形成单链 DNA； B.退火：将反应混合液冷却至某一温度，使引物与模板结合。 C.延伸：在 DNA 聚合酶和 dNTPs 及 Mg2＋存在下，退火引物沿 5‘ —— 3’ 方向延伸。 以上三步为一个循环，如此反复。 3. 逆转录酶和 RT-PCR 逆转录酶（reverse transcriptase）是存在于 RNA 病毒体内的依赖 RNA 的 DNA 聚合酶，至少具有以下三种活性： (1)依赖 RNA
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