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上海细胞克隆实验
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上海达为科生物科技有限公司
细胞克隆实验
软琼脂克隆:克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状实验步骤:1.获取样本,培养细胞,2.调整细胞悬液密度为1x103个/ml细胞。3.制备底层琼脂,完全溶化的5%琼脂和37*C左右预温的新鲜完全培养液以1: 9比例在40^C均匀混合,加入培养皿(直径60mm)中,每皿含0.5%琼脂培养基2ml,室温下琼脂完全凝固。4.制备上层琼脂,37C密度每皿含200个的细胞悬液1.5m移入小烧杯中,加入40C、5%琼脂等体积混匀,即成0.25%半固体琼脂培养基。配好的半固体琼脂培养基立即加入铺有底层琼脂的培养皿中,室温下琼脂凝固。37C、5%CO2静置培养2-3周。5.当培养皿中出现肉眼可见克隆时,终止培养,弃去培养液,PBS液小心浸洗2次,空气干燥。甲醇固定15分钟,弃甲醇后空气干燥。用Giemsa染液染色10分钟,流水缓慢洗去染液,空气干燥。
实验周期及交付标准:1.实验周期: 1-2周2.交付标准:克隆形成图片、计数结果、柱状图、实验报告(实验步骤、试剂、仪器等)细胞包克隆化其他方法:1.稀释铺板方法2.饲养层克隆法3.毛细管克隆法4.荧光激活分选法
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