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- 2026年01月08日
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上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
细胞克隆实验
一、定义与核心目的
细胞克隆实验是通过观察单个细胞在体外连续增殖6代以上形成细胞集落（克隆）的技术，用于评估细胞增殖能力、群体依赖性及对杀伤因素的敏感性。其核心指标为克隆形成率（接种存活率），计算公式为：
核心目的包括：
- 评估增殖能力：检测药物、基因修饰等处理后细胞的增殖潜力；
- 评价敏感性：分析肿瘤细胞对化疗药物或辐射的敏感性；
- 预测成瘤性：体外克隆能力强的癌细胞更可能在体内形成肿瘤，作为成瘤性模拟指标。
二、实验分类与适用场景
| 方法 | 培养介质 | 适用细胞类型 | 优势 |
|---|---|---|---|
| 平板克隆 | 固体培养基 | 贴壁细胞（如肿瘤细胞系） | 操作简单，模拟体内贴壁生长环境 |
| 软琼脂克隆 | 半固体琼脂 | 悬浮细胞（如造血干细胞） | 检测非锚定依赖性生长，适用于转化细胞系 |
选择依据：
- 贴壁细胞研究群体依赖性选择平板克隆；
- 悬浮细胞或转化细胞需用软琼脂克隆。
三、实验步骤与关键技术
通用流程（以平板克隆为例）：
-
细胞悬液制备：
- 取对数生长期细胞，0.25%胰酶消化至单细胞悬液，完全培养基（含10%胎牛血清）重悬。
- 关键点：彻底分散细胞团块（显微镜确认），避免接种密度过高（通常每孔400-1000个细胞）。
-
接种与培养：
- 梯度稀释细胞悬液，接种至6孔板或培养皿，37℃、5% CO₂条件下培养2-3周。
- 换液技巧：每隔3天缓慢加入培养基，防止冲散贴壁细胞。
-
固定与染色：
- 肉眼可见克隆时终止培养，PBS洗涤后4%多ju甲醛固定30-60分钟，结晶紫染色10-20分钟。
- 注意事项：彻底清洗染色残留，避免背景干扰。
-
数据采集与分析：
- 拍照记录后，统计≥50个细胞的克隆数，计算克隆形成率。
- 补充分析：克隆大小分布可反映细胞增殖速率差异。
软琼脂克隆特殊步骤：
- 琼脂层制备：底层为0.5%琼脂，上层为0.3%琼脂与细胞悬液混合，悬浮培养避免细胞接触培养皿底部。
- 适用场景：检测悬浮肿瘤细胞的锚定非依赖性生长能力。
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文献和实验一、遗传变异细胞和正常细胞1.小鼠类3T3 胚胎成纤维细胞 L929 成纤维细胞3T3/e 成纤维细胞 Mo-MuLV/3T3 Mo-MuLV感染的3T33T3TK 成纤维细胞 NIH3T3 NIH Swiss小鼠胚细胞3T6 胚胎成纤维细胞 *PA317 胚胎成纤维细胞Ana-1 巨噬细胞 SRSV/3T3 SRSV转化的3T3*CTLL-2 T细胞 2.大鼠类BRL 肝细胞 LW-3 肝细胞BRL 3A 肝细胞
声明 ：本帖转自小木虫生物论坛 全文如下 近看到很多人求关于分子克隆方面的视频，本人原来发的一个帖子也不怎么好用了，好像是纳米盘的问题，现再次把总结的视频发到网上，希望能给大家提供方便。（视频可以下载观看，本人亲测） 感受态细胞的制备 http://u.115.com/file/dn6iwyka 载体质粒的制备及鉴定 http://u.115.com/file/dn6iwx69 染色体DNA的酶切与电泳鉴定 http://u.115.com/file
xuelang09nianhao 现在我在做分子生物学实验 急需 希望哪位大侠给找一下 谢谢 可以发到我的邮箱：xueliangliang2008@163.com zhujoker freecell建议：这里下载好像更快些。http://www.seekbio.com/soft/459.html 你提供的地址下册不能下载。 分子克隆实验指南(第三版)中文版 上下册共275mb
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