上海免疫组化实验

一、基本原理

1. 抗原抗体特异性结合
   利用已知抗体标记显色剂（如荧光素、酶、胶体金等），与组织或细胞中的抗原结合，通过化学反应显色，实现抗原的可视化。
2. 标记物显色
   根据标记物类型不同，显色方式包括荧光显微镜观察（荧光素）、酶催化底物显色（如DAB）或电子显微镜观察（胶体金）。

二、技术分类

1. 按标记物分类
   • 免疫荧光法：荧光素标记抗体，荧光显微镜下观察。
   • 免疫酶法：酶（如HRP）标记抗体，催化底物生成有色产物（如DAB显 brown 色）。
   • 免疫金法：胶体金标记抗体，电子显微镜下高分辨率定位。
2. 按操作步骤分类
   • 直接法：抗体直接标记显色剂，步骤简单但灵敏度低。
   • 间接法：通过二抗或桥联物放大信号，灵敏度高（如PAP法、ABC法）。

三、主要应用

1. 病理诊断
   • 判断肿瘤类型（如腺癌、鳞癌）、良恶性鉴别及转移灶溯源。
   • 辅助软组织肿瘤分类，解决形态学难以区分的问题。
2. 治疗与预后评估
   • 指导靶向治疗（如HER2检测）、预测药物敏感性。
   • 评估肿瘤侵袭性及患者生存率。
3. 科研与检测
   • 分析细胞因子、激素受体分布（如ER/PR检测）。
   • 研究蛋白质表达与疾病关联（如Ki67增殖指数）。

四、实验流程（以石蜡切片为例）

1. 样本处理
   • 脱蜡至水，抗原修复（微波或高压锅加热暴露抗原）。
2. 免疫反应
   • 封闭非特异性位点（如正常血清），孵育一抗（4℃过夜或37℃1-2小时）。
   • 加二抗及酶标试剂（如HRP聚合物），显色（DAB/AEC）。
3. 后处理
   • 复染（苏木素染细胞核）、脱水封片，镜检分析。

五、关键注意事项

1. 组织固定
   • 及时使用4%多ju甲醛固定，避免抗原降解。
2. 抗体选择
   • 单克隆抗体特异性高，多克隆抗体灵敏度高，需根据抗原特性选择。
3. 显色控制
   • 显色时间需严格监控，过长导致背景染色，过短则信号弱。
4. 背景干扰
   • 灭活内源性酶（如H₂O₂）、优化封闭步骤以减少非特异性染色。