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- SILAC(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)即细胞培养条件下稳定同位素标记技术，这种方法首先是由2002年丹麦Mann的实验室对AACT技术做了进一步改进而获得的，他们首次应用于定量蛋白质组研究，为全面、系统地定性和定量分析复杂细胞蛋白质组提供了有效的方案。
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- 2026年07月24日
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杭州景杰生物科技股份有限公司
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蛋白质组学
SILAC蛋白质组学
服务简介
SILAC(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)即细胞培养条件下稳定同位素标记技术，这种方法首先是由2002年丹麦Mann的实验室对AACT技术做了进一步改进而获得的，他们首次应用于定量蛋白质组研究，为全面、系统地定性和定量分析复杂细胞蛋白质组提供了有效的方案。
技术原理
SILAC的基本原理是分别用天然同位素（轻型）或稳定同位素（重型）标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经>6个倍增周期后，稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中取代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定。其基本原理与技术流程如下图所示：
仪器设备
Thermo Scientific Q Exactive HF-X
Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos
Thermo Scientific Q Exactive Plus
Thermo Scientific Orbitrap Fusion
Thermo Scientific Q Exactive
技术优势
多个样本混合后同时进行分离、酶切和鉴定，后续实验对样品的影响是一致的，减少了实验操作和仪器设备引入的定量误差；
体内标记技术，标记不受裂解液成分影响，效果稳定，标记效率高达99%；
可以对在DMEM、DMEM-F12、1640三种培养基中培养的多种细胞进行标记；
灵敏度高，样本量要求少。
应用领域
疾病标志物筛选
作用机制研究
药物作用靶点研究
特殊功能蛋白质筛选
参考文献
1. Kim JY, et al. 2013. Dissection of TBK1 signaling via phosphoproteomics in lung cancer cells. PNAS.
2. Sobczyk GJ, et al. 2014. SILAC-based proteomic quantification of chemoattractant-induced cytoskeleton dynamics on a second to minute timescale. Nature Commun.
3. Ravikumar V, et al. 2014. Quantitative phosphoproteome analysis of Bacillus subtilis reveals novel substrates of the kinase PrkC and phosphatase PrpC. Mol Cell Proteomics.
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文献和实验1. Kim JY, et al. 2013. Dissection of TBK1 signaling via phosphoproteomics in lung cancer cells. PNAS.
2. Sobczyk GJ, et al. 2014. SILAC-based proteomic quantification of chemoattractant-induced cytoskeleton dynamics on a second to minute timescale. Nature Commun.
3. Ravikumar V, et al. 2014. Quantitative phosphoproteome analysis of Bacillus subtilis reveals novel substrates of the kinase PrkC and phosphatase PrpC. Mol Cell Proteomics.
1. 前目 叶绿体是绿色植物组织中一种重要的器官，其主要功能是执行光合作用。除此之外 ，许多重要的化合物也在叶绿体内合成，如植物激素、脂肪酸和油脂、氨基酸、维生素、嘌呤、嘧啶核酸、四吡咯类化合物及类异戊二烯等。叶绿体也是植物细胞内同化氮和硫的场所 [1] 。其内包含有大量的蛋白质结合伴侣、定位元件、辅因子伴侣、组装元件、肽酶及蛋白酶等，对于蛋白质生物合成和胞内平衡具有重要作用。叶绿体内的蛋白质种类多样，包括与质体 DNA 及 mRNA 结合的蛋白质，这些蛋白质对叶绿体内基因的表达具有重要
Bradford 的dye-binding method 是利用Coomassie brilliant blue G-250 （CBG） 可与蛋白质结合而变色的特性来定量 （Bradford, 1976）；若试样中的蛋白质量较多，则结合到蛋白质而变色的CBG 也多，因而呈色较深。下例是以一组标准蛋白质为对象，制作一条蛋白质量与吸光度的标准校正线。仪器用具：ELISA光度计 （Dynatech） 可在一分钟内测完一片滴定盘微量滴定盘 （microtiter plate, Nunc F96
本节课程介绍了label-free定量蛋白质组学技术的原理及应用。主要包括：（1）以MS数据为例，系统介绍label-free技术进行蛋白质定量的技术流程和原理。（2）介绍免费的label-free分析套件—Maxquant和Perseus。（3）以免疫沉淀（IP）数据为例，展示label-free进行蛋白质互作定量的应用。（4）以数据为例，展示label-free在外泌体蛋白定量分析中的应用。
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