SILAC定量蛋白质组学分析

服务简介

       SILAC(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)即细胞培养条件下稳定同位素标记技术，这种方法首先是由2002年丹麦Mann的实验室对AACT技术做了进一步改进而获得的，他们首次应用于定量蛋白质组研究，为全面、系统地定性和定量分析复杂细胞蛋白质组提供了有效的方案。

 

技术原理

       SILAC的基本原理是分别用天然同位素（轻型）或稳定同位素（重型）标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经>6个倍增周期后，稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中取代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定。其基本原理与技术流程如下图所示：

 

仪器设备

       Thermo Scientific Q Exactive HF-X

       Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos

       Thermo Scientific Q Exactive Plus

       Thermo Scientific Orbitrap Fusion

       Thermo Scientific Q Exactive

 

技术优势

       多个样本混合后同时进行分离、酶切和鉴定，后续实验对样品的影响是一致的，减少了实验操作和仪器设备引入的定量误差；

       体内标记技术，标记不受裂解液成分影响，效果稳定，标记效率高达99%；

       可以对在DMEM、DMEM-F12、1640三种培养基中培养的多种细胞进行标记；

       灵敏度高，样本量要求少。

 

应用领域

       疾病标志物筛选       

       作用机制研究

       药物作用靶点研究     

       特殊功能蛋白质筛选

 

参考文献

1. Kim JY, et al. 2013. Dissection of TBK1 signaling via phosphoproteomics in lung cancer cells. PNAS. 

2. Sobczyk GJ, et al. 2014. SILAC-based proteomic quantification of chemoattractant-induced cytoskeleton dynamics on a second to minute timescale. Nature Commun.

3. Ravikumar V, et al. 2014. Quantitative phosphoproteome analysis of Bacillus subtilis reveals novel substrates of the kinase PrkC and phosphatase PrpC. Mol Cell Proteomics.