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北京诺禾致源科技股份有限公司
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外泌体定量蛋白质组
外泌体中的蛋白质居多,其涉及的功能范围较广,外泌体蛋白质组学目前可用于研究外泌体蛋白质在免疫调节、抗原呈递、癌症转移、肿瘤浸润、血管新生、神经发育中的生物学功能,亦可揭示其在标志物的筛选与鉴定、药物靶点的发现以及功能机制中的作用。
参考文献:Colombo M, Raposo G, Théry, Clotilde. Biogenesis, secretion, and intercellular interactions of exo-somes and other extracellular vesicles[J]. Annu Rev Cell Dev Biol, 2014, 30(1): 255-289.
外泌体的分离方法主要有:超速离心法(又叫差速离心法)、超滤离心法、密度梯度离心法、磁珠免疫法、多聚物沉淀法、色谱法等,各分离方法各有优缺点,但是 CNS 杂志上主流的方法仍是超速离心法,超速离心法准确性高、重复性好,能最大限度减少蛋白质聚集体和其他膜粒子的共纯化。外泌体的鉴定方法主要有:透射电子显微镜(TEM)、粒径分析(纳米流式检测仪)、蛋白指标检测(Western Blot、流式细胞术)。
外泌体成分的鉴定可通过质谱检测技术来实现,定量蛋白质组学技术可进行对外泌体蛋白质组成及含量的分析。


研究思路
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文献和实验注:如同时要求外泌体抽提、鉴定及蛋白质组学,请将样本要求量进行加和。 备注:请明确提供的样本体积。细胞上清及尿液,超过 50ml,每 50mL 算作一个 1 个样本,以此计算样本数,核算抽提周期。血清、血浆、关节液、脑脊液进行超速离心,每 5mL 算作 1 个样本,以此计算样本数,核算抽提周期。
本节课程介绍了label-free定量蛋白质组学技术的原理及应用。主要包括:(1)以MS数据为例,系统介绍label-free技术进行蛋白质定量的技术流程和原理。(2)介绍免费的label-free分析套件—Maxquant和Perseus。(3)以免疫沉淀(IP)数据为例,展示label-free进行蛋白质互作定量的应用。(4)以数据为例,展示label-free在外泌体蛋白定量分析中的应用。
定量蛋白质组学分析 定量蛋白质组学分析(Quantitative Proteomics)是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白,结合生物信息学揭示细胞生理病理等功能,同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。目前定量蛋白质组学技术常见标记(Label)和非标记的(Label Free)定量策略。 定量蛋白质组学技术常见的几类主要包括:Label Free定量蛋白组分析、SILAC与免疫
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