半胱氨酸氧化还原修饰组学 蛋白质组学

       在细胞内，活性氧和氮类可以对特定氨基酸进行各种化学修饰，调节氧化还原平衡。氧化还原作为生化反应基础的主导作用，在细胞中与氧化和还原过程相关的蛋白质是最丰富的（Nature. 2020 Jun;582(7813):592-596. ）。半胱氨酸由于其固有的亲核性和氧化还原敏感性，可发生广泛的氧化还原修饰，包括 S- 亚硝基化、S- 次磺酸化、 S- 硫巯基化、S- 谷胱甘肽化等。

       景杰生物提供多种氧化还原修饰组学服务，助力研究人员解密氧化还原修饰对于机体生理和病理的调控机制。

 

技术原理

       景杰生物半胱氨酸氧化还原修饰组学可以提供2种技术路线：

1. 提供过亚硝基化、谷胱甘肽化修饰的位点鉴定和定量分析，其采用的策略为选择性还原 , 即首先封闭蛋白质组上所有还原型巯基 , 然后采用化学 / 酶学体系选择性地将可逆氧化型修饰还原为巯基 , 最后采用功能化巯基反应性试剂或固相载体 ( 如树脂辅助捕获法）进行富集和上样至液相色谱 - 串联质谱中进行分析，通过相应的数据库检索匹配和生信分析，获得鉴定位点和定量结果信息。

 

2. 检测采用经典的ABE法，即首先将样本用含有N- 乙酰半胱氨酸（NEM）的缓冲液处理，以阻断自由的硫醇基；接着与特异性还原剂处理，切断并生成新的自由硫醇基；然后加入HPDP-biotin，使其与新形成的自由硫醇基反应，形成生物素标记的蛋白质；接着酶解蛋白形成短肽并利用链霉亲和素珠子富集生物素化的肽段；最后对分离的肽段通过10X质谱仪器鉴定氧化还原修饰的蛋白质和修饰位点。

 

仪器设备

Thermo Scientific Orbitrap Astral 

Bruker timsTOF Pro2/HT

Bruker timsTOF Pro

Thermo Scientific Orbitrap Exploris 480

Thermo Scientific Q Exactive HF-X

Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos

Thermo Scientific Q Exactive Plus

Thermo Scientific Orbitrap Fusion

Thermo Scientific Q Exactive

 

技术优势

常规动物细胞 / 组织：

1｜鉴定到氧化还原位点数 3000-5000

2｜鉴定到氧化还原肽段数 2500-4000

常规植物细胞 / 组织：

1｜鉴定到氧化还原位点数 5000-8000

2｜鉴定到氧化还原肽段数 8000-20000

 

参考文献