上海肝组织HE染色实验

一、HE染色的基本原理

HE染色（苏mu精-伊红染色）是组织学中最经典的染色方法，其原理基于酸性/碱性染料与组织成分的化学结合：

1. 苏mu精（碱性染料）：与细胞核内的DNA（酸性）结合，通过金属离子（如铝）媒染后形成稳定的蓝紫色复合物。
2. 伊红（酸性染料）：与细胞质、胶原纤维等蛋白质（碱性）结合，呈现粉红色。
3. 酸碱平衡调控：染色液的pH值影响染料亲和力，如分化步骤通过盐酸乙醇去除过染的苏mu精，返蓝液（碳酸锂或an水）中和酸性环境以恢复核的蓝色。

二、肝组织HE染色的标准化流程

（结合多篇文献的操作步骤优化）

1. 样本前处理

   • 固定：新鲜肝组织需立即用4%多ju甲醛固定≥48小时，防止自溶并维持结构。
   • 脱水与包埋：梯度乙醇（70%-100%）脱水，二甲苯透明，石蜡浸透后包埋。肝组织推荐切片厚度4μm以清晰显示肝小叶结构。

2. 染色步骤

   步骤	试剂/操作	时间	关键参数
   脱蜡	二甲苯Ⅰ、Ⅱ	各10分钟	需彻底溶解石蜡
   复水	梯度乙醇（100%→70%）	各5分钟	防止组织收缩
   苏mu精染色	10%苏木素染液	5-10分钟	染色深度需镜检调整
   分化	0.5%盐酸乙醇	5-30秒	肝细胞核密集，需精准控制
   返蓝	流水冲洗或1%碳酸锂	5分钟	恢复核的蓝色
   伊红染色	1%伊红染液	1-5分钟	胞质过染需乙醇梯度洗脱
   脱水封片	梯度乙醇→二甲苯→中性树胶	各2-5分钟	避免残留水分导致浑浊

特殊注意事项：

• 分化控制：肝组织细胞核密集，分化不足会导致核浆对比模糊，过度则核淡染。
• 返蓝替代方案：部分实验室用自来水长时间冲洗（≥15分钟）代替碳酸锂。
• 防脱片处理：肝组织含较多脂质，建议使用多聚赖氨酸包被载玻片。

三、肝组织的特殊处理要求

1. 固定优化：

   • 肝血窦丰富，需灌注固定（活体取材）或切薄块（≤5mm）以加速固定剂渗透。
   • 脂肪肝样本需延长固定时间至72小时，防止脂质溶解影响染色。

2. 染色调整：

   • 脂肪变性区域：伊红染色时间缩短至15秒，避免脂滴溶解形成的空泡过染。
   • 纤维化样本：苏mu精染色延长至8分钟，增强核与纤维结构的对比。

3. 病理评估配套技术：

   • Masson三色染色：联合用于评估肝纤维化程度，HE染色对早期纤维化不敏感。
   • 天狼星红染色：鉴别Ⅰ/Ⅲ型胶原分布，辅助肝硬化的分期。