TSA多重免疫荧光染色的实验步骤
互联网
6006
实验流程：
多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上，随后即可衔接下一轮单标染色，直至全部标记完成，即可复染DAPI后封片观察。
1.脱蜡水合：
1）新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。
2）梯度乙醇浸片，100% 5min；95% 5min；70% 2min。
3）灭菌水洗片1min，重复3次。
4）10%中性福尔马林浸片10min，灭菌水洗片1min，重复3次。
2.微波修复：
1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中，用抗原修复液1×工作液浸没。
2）将修复杯置于微波炉内高火煮沸。
3）低火维持15min。
4）取出室温自然冷却至室温。
3.封闭：
1）去除玻片上残存洗液。
2）用组画笔圈出玻片上的样本区域，滴加封闭剂，覆盖样本区域。
3）室温保湿震荡10min。
4.一抗孵育：
1）去除玻片上的封闭剂。
2）用移液器滴加稀释的一抗溶液，浸没样本区域。
3) 37℃恒温保湿震荡孵育1hr。
4）用1×TBST buffer浸洗玻片3min，重复1次。
5.二抗孵育：
1）去除玻片上残存的洗液。
2）直接滴加二抗溶液，浸没样本区域。
3）室温保湿震荡孵育10min。
4）用1×TBST buffer 浸洗玻片3min，重复1次。
6.荧光染色放大信号：
1）去除玻片上残存洗液。
2）用移液器在玻片上滴加1X染料工作液100ul（使用信号放大液按1:100稀 释），浸没样本区域。
3）室温 保湿震荡孵育10 min。
4） 1X TBST buffer浸洗玻片，室温浸片3 min，重复3次
5） 微波修复，室温自然冷却至室温。
6）灭菌水洗片1次，1X TBST buffer浸片2min。
7）单染结束，封片观察或追加后续染色。
7.封片：
1）去除玻片上残存洗液，滴加DAPI工作液，室温保湿孵育5min。
2）1×TBST buffer浸洗玻片，室温浸片3min。
3）用灭菌水洗片2min。
4）待玻片微干，用移液器在玻片上滴加超强抗淬灭封片剂，浸没样本区域。
5）加盖玻片，指甲油封片。
6）阅片。
本试剂盒仅供科研使用。
