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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
表观生物
- 服务名称:
m1A-seq RNA甲基化测序
N1-methyladenosine(m1A)是一种重要的RNA转录后修饰,是RNA分子腺嘌呤第1位氮原子上的甲基化修饰,首次报道是在50多年前[1]。2016年,何川等人[2]发现m1A对甲基化mRNA的翻译具有促进作用,存在于多种不同的真核细胞基因转录本中,包括酵母菌到哺乳动物,使我们重新认识m1A。越来越多的研究发现,m1A不仅影响局部RNA结构、蛋白-RNA相互作用以及5’UTR的翻译,还存在于tRNA、rRNA、mRNA和线粒体转录本[3],在维持这些ncRNA的正确结构和功能上发挥重要的作用[4]。
m1A修饰的相关研究初露峥嵘,提示我们这个新的RNA甲基化修饰有着巨大的研究意义。表观生物一直专注于表观遗传学研究领域,推出m1A-seq整体服务,绘制全转录组m1A甲基化修饰图谱,帮助客户揭示m1A修饰的未知功能与机制。
技术原理
送样要求
样本类型:
1. 总RNA质量>100 μg/样本
2. 细胞数量>3 X107个细胞/样本
3. 组织质量>100 mg/样本
样本物种:仅限人、大小鼠,其他物种需评估。
分析内容
基本分析
1. 原始数据过滤及质控
2. 参考基因组比对
3. Reads 在染色体上的分布
4. Peak Calling 分析
5. Peak 可视化
6. Peak 统计分析
7. Motif分析
8. m1A 的基本特征
• Peak 在基因元件的分布
• Reads 在基因元件的分布
• Peak 关联基因的特征
9. 差异Peak 分析
10. 差异Peak 关联基因GO,KEGG 分析
高级分析
1. RNA-seq 表达差异与m1A 修饰差异关联分析
2. 翻译组RIBO-seq 翻译差异与m1A 修饰差异关联分析
3. m1A修饰差异与GWAS数据库关联分析
图1. Peaks结构百分比图[2]
图2. m1A修饰位点富集于AUG起始密码子附近[2]
图3. m1A修饰motif分析[2]
图4. 某特定基因的m1A修饰区域[2]
Chuan He, et al. Nature, 2016. 真核生物mRNA的动态m1A甲基化图谱[2]
研究者利用新研发的测序方法,发现m1A富集于起始密码子的第一个拼接位点的上游,优先修饰更多的结构区域和选择性翻译起始位点,对生理情况作出动态的应答,且与蛋白质产量正相关。m1A的这些特征在小鼠和人类细胞中高度保守,表明m1A对甲基化mRNA的翻译具有促进作用。
图5. m1A在mRNA中是一种动态修饰,对变化的生理和应激条件
作出应答
图6. 在启动密码子附近的m1A与高蛋白水平相关
PNAS:RNA 修饰通过ATP5D调控肿瘤细胞糖酵解[5]
研究者通过测序和功能研究证实,ATP5D是ATP合成酶最重要的亚单位之一,参与m1A去甲基酶ALKBH3调节的癌症细胞糖酵解。m1A修饰的ATP5D外显子 通过增加与YTHDF1/eRF1复合物的结合来负调控其翻译延伸,从而促进核糖体复合物释放mRNA。m1A还调节E2F1的mRNA稳定性,E2F1直接与ATP5D启动子结合,启动它的转录。利用dm1 ACRISPR系统,靶向ATP5D m1A,去甲基化,显著提高了ATP5D的表达和癌症细胞的糖酵解。体内实验证明m1A/ATP5D在肿瘤生长和癌症进展中的作用。此研究揭示了mRNA m1A修饰和细胞代谢的联系,对这些相互作用的进一步理解,对癌症治疗至关重要。
图5. m1A-seq 显示野生组和 ALKBH3-/-HeLa 细胞ATP5D 基因 CDS 区的 m1A 富集峰参考文献
[1] DUNN DB. The oc currence of 1-me thyladenine in ribonucleic acid. Biochim Biophys Ac ta. 1961 Jan 1;46:198-200.
[2] Dominissini D, e t al. The dynamic N(1)-me thyladenosine methylome in euk aryotic messenger RNA. Na ture. 2016 F eb 25;530(7591):441-6.
[3] Zhang C, et al. Reversible RNA modification N(1)-methyladenosine(m(1)A) in mRNA and tRNA. Genomics Proteomics Bioinformatics. 2018. 16(3), 155‒161.
[4] Roundtree IA, e t al.. Dynamic RNA modific ations in g ene expression regulation. Cell 2017:169(7), 1187‒1200.
[5] Wu Y, Chen Z, Xie G, et al. RNA m1A methylation regulates glycolysis of cancer cells through modulating ATP5D. PNAS. 2022;119(28):e2119038119. doi:10.1073/pnas.2119038119
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文献和实验[1] DUNN DB. The oc currence of 1-me thyladenine in ribonucleic acid. Biochim Biophys Ac ta. 1961 Jan 1;46:198-200.
[2] Dominissini D, e t al. The dynamic N(1)-me thyladenosine methylome in euk aryotic messenger RNA. Na ture. 2016 F eb 25;530(7591):441-6.
[3] Zhang C, et al. Reversible RNA modification N(1)-methyladenosine(m(1)A) in mRNA and tRNA. Genomics Proteomics Bioinformatics. 2018. 16(3), 155‒161.
[4] Roundtree IA, e t al.. Dynamic RNA modific ations in g ene expression regulation. Cell 2017:169(7), 1187‒1200.
[5] Wu Y, Chen Z, Xie G, et al. RNA m1A methylation regulates glycolysis of cancer cells through modulating ATP5D. PNAS. 2022;119(28):e2119038119. doi:10.1073/pnas.2119038119
NGS已成为生命科学领域中基因组学和转录组学研究的金标准。虽然它与桑格测序等方法有某些核心相似之处,但NGS所能实现的绝对的高通量水平使它与其他方法截然不同,并彻底改变了科学家的工作方式。 RNA测序(RNA-seq)尤其处于NGS功能应用的前言沿。RNA-seq最简单的形式允许我们在取样时确定样本中的RNAs的丰度。转录组是一个高度动态的细胞特征,并打开了一个巨大发掘潜力的世界。对药物、各种疾病状态、转录后修饰和选择性剪接转录本的反应变化只是 RNA-Seq 使其能够发现的一些例子
RNA测序 (RNA Sequencing,简称RNA-Seq) ,是基于高通量测序技术的转录组学研究方法,可以快速对基因组中的RNA种类和数量进行分析,揭示特定生物学或疾病发生过程中的分子机制。
浅谈 RNA 测序:从阿尔茨海默症相关星形胶质细胞的发现说起
的人脑中出现,表明它们与遗传和年龄相关因素有关。许多研究发现,AD 发生后星形胶质细胞在神经胶质细胞病变过程中发挥着重要的作用。但是疾病状态下可能存在不同的星形胶质细胞表型,并且对于疾病的进展作用可能有所不同。因此,星形胶质细胞和其他非神经元细胞的高分辨率表征可以帮助鉴定参与 AD 发病机理的新型细胞成分。1. 利用单核 RNA 测序发现与 AD 相关的新型星形胶质细胞(Disease Associate Astrocyte, DAA)该研究利用 sNuc-seq 技术建立海马区的细胞分子图谱,使用
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