Assembly 无缝组装试剂

Catalog NO.SCAP-10/500
产品规格： 10次反应、50次反应
试剂保存：-20℃保存，不宜反复冻融

产品简介：

无缝组装试剂盒提供了一种新颖、高效、快速的基因组装方法，只需相邻的DNA首尾之间与载体两端具有大约20个同源碱基序列，就可以在载体的任意位点完成多个目标DNA片段的克隆重组，不需要任何限制性内切酶和连接酶。例如，当DNA片段较长不易扩增时，可将长片段分解为多个短片段分别扩增， 各片段首尾重叠大约20bp，再利用本试剂盒连接成一个片段。

产品特点：

1.灵活的位点选择：可以在载体的任意位置进行基因克隆及组装。
2.快速简便：PCR产物不需末端补平。载体只需线性化，无需去磷酸化。
3.精确：增加任何额外的碱基。
4.多用途：适用于各种自备载体、插入片断、或者酶切位点。
5.克隆效率高：高达90%阳性克隆。
6.高通量操作：在进行高通量基因克隆和组装时，优势更为突出。

操作流程：

1.采用双酶切或PCR扩增方法将载体线性化。
2.使用设计好的引物进行目的DNA片段的PCR扩增。
3.将目的DNA 片段和线性化载体以摩尔比1:1 加到试管中进行重组反应：

4.混匀后在42℃孵育30 分种，然后转移到冰上。
5.使用2～5 μl反应液转化到感应态细菌中。

引物设计要点：

1.引物设计时应该在遵循常规引物设计原则的基础上，把大约20个同源碱基序列导入引物。
2.随着待组装的目标DNA片段数量增多，如多于3个片段时，引物中同源碱基数量也应随之增加。
3.引物的质量对组装反应的成功率有很大影响，因此强烈建议使用HPLC或PAGE纯化的引物。

（一）根据载体末端不同类型进行如下引物设计：

（二）连接相邻的DNA 片段时所使用的引物设计：

当需要连接两个相邻的DNA 片段，所需要大约20nt同源性序列可以由正向引物和反向引物共同提供。下图显示了DNA 片段1 的反向引物和片段2 的正向引物分别提供9nt和9nt 的同源重组所需的18nt。粗体字母显示引物所含的同源性序列，引物的3’端则为目的基因序列。