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- BIOMIGA
- LIC1101-25
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- 2025年09月14日
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上海善然生物科技有限公司
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室温
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50T
| BMG无缝克隆和组装技术是一种新的、快速、简洁的克隆方法。传统的PCR产物克隆方法主要有两种：一种是PCR引物设计时引入载体上的酶切位点，PCR产经双酶切后定向克隆到目的载体上；另一种是TA载体连接。这两种方法费时费力，过程繁冗。BMG无缝克隆和组装技术旨在克服上述缺陷，它可以在质粒的任何位点进行一个或多个目标DNA的片段的插入，而不需要任何限制性内切酶和连接酶，长片段基因多达12Kb都可以有效地克隆到载体。整个载体构建仅需30分钟，适合于任何载体。 | ||||
| LIC1101-25 | BMG无缝克隆试剂盒 | BMG无缝克隆试剂盒 | 25 T | 1,580.00 |
| LIC1101-50 | BMG无缝克隆试剂盒 | BMG无缝克隆试剂盒 | 50 T | 2,960.00 |
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文献和实验上篇我们对经典分子克隆技术和无缝组装克隆技术进行了比较，经典分子克隆兜兜转转、如琢如磨，而无缝组装克隆技术却能做到操作简单和方便快捷。那它究竟是如何实现的呢？本期我们就来具体聊聊无缝克隆的四步致胜奇招。 无缝组装克隆之 Step 123——带你飞，把还在用传统方法“琢磨”的他甩在后面 基于同源序列的无缝组装克隆技术，关键是利用 PCR 引物，在目标片段两端引入与线性化载体两端同源的一段序列。基本策略是 选定插入外源片段的位置，以此线性化载体 设计包含线性化载体两端序列和目标片段两端序列的引物
1. 质粒载体构建不成功（目的片段和载体不能成功连接）的常见原因分析 ①DNA 片段纯度差：体系中的杂质会降低连接效率，如果使用不纯化直接连接的方法一直无法成功构建载体，可以考虑进行纯化后再进行连接； ②目的片段和载体片段使用比例悬殊，或者用量过多或过少：目的片段和载体的摩尔比需要控制在一定范围之内，否则会影响连接效率，具体比例可以草靠连接酶说明书； ③连接条件不当：比如连接时间不足、温度不合适、酶失活等，可以通过设置对照组来排查原因； ④引物设计问题：比如通过无缝克隆的方式进行连接，同源
设计工作，一般很多软件都可以进行引物设计，例如pirmer5之类的软件。除了常用的酶切连接的方法也可以使用无缝克隆的方法构建，选用哪种方法我们都要在引物设计的时候考虑到，酶切连接的方法和无缝克隆引物设计注意点如下：1） 无缝克隆方法设计引物的时候要加入同源重组臂序列。2） 做酶切连接引物设计要注意加上保护碱基，保护碱基大部分加入4个碱基可以满足大多数内切酶，也可以参照限制性内切酶保护碱基添加表加保护碱基。在扩增前我们应了解目的片段是否有高GC、或者重复序列之类的特殊序列，还有片段长度都会影响实验，不推荐一次
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