siRNA转染试剂

SunBioTM Trans-EZ siRNA转染试剂说明书

Caralog NO.STP07005 产品规格：1 ml/支
试剂保存：4℃保存，请勿冷冻
产品介绍
SunBio^TM Trans-EZ siRNA适用于绝大多数原代培养细胞和转化细胞株的siRNA转染，以抑制内源性基因或外源性基因的表达。在最佳实验条件下，转染后细胞的存活率高达90%以上，转染效率高于其他类型的转染试剂。特点：1.转染效率高； 2.细胞毒性低；3.生物稳定性高；4.适用范围广泛；5.不受有无血清及抗生素的影响；6. 操作简单，无需更换培养基。
转染概要
1. 细胞状态很大程度上影响了转染效率，推荐使用低代次细胞，并保证细胞状态良好；
2. 为优化转染条件，推荐使用Opti-MEM培养基制备转染试剂和质粒复合物；如果没有准备Opti-MEM培养基则用无血清培养基代替；
3. 为起始优化转染条件，转染细胞时可以分别用1/2、2/2、3/2、4/2、5/2转染试剂（µl）和质粒的比例（µg）分别转染；
4. 为增加实验的准确性和减少检测的误差，建议进行三个平行孔实验；
转染流程
1. 转染前一天，将细胞悬液接种到孔板中，控制细胞转染时的汇合率为70-90%。
2. 制备转染试剂和质粒的复合物：
a．取待转染质粒，用Opti-MEM培养基轻轻混匀；
b．取Trans-EZ转染试剂，用Opti-MEM培养基轻轻混匀；
c．将Trans-EZ稀释液滴加到质粒稀释液中，边加边轻轻混匀，在室温放置20分钟，使DNA和Trans-EZ充分结合形成稳定的转染复合体。
3. 取出细胞培养板，将步骤2得到的DNA-Trans-EZ复合体加入到接种好的细胞中，前后轻轻推摇孔板使混合均匀，做好标记，放回培养箱。
4. 转染24-48小时后，观察质粒荧光转染效果，或者检测Luciferase酶活性，或者收取总蛋白做WesternBlot/RT-PCR等检测。
转染系数参考

培养板型号	每孔平均底面积	铺板细胞悬液体积	DNA和稀释液总体积	Trans-EZ和稀释液总体积
96-well	0.3 cm2	100 μl	0.4-0.6μg in 7.5 μl	0.2-1μl in 7.5 μl
24-well	2 cm2	500 μl	0.8-1.2μg in 30 μl	1-2.5μl in 30 μl
12-well	4 cm2	1 ml	1.8-2.5μg in 50μl	2-4μl in 50 μl
6-well	10 cm2	2 ml	3.5-5 μg in 100 μl	4-8μl in100μl
60-mm	20 cm2	5 ml	8-10 μg in300 μl	8-20μl in300 μl
10-cm	60 cm2	15 ml	24-28μg in 800 μl	20-60μl in800 μl