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荧光法L丙氨酸检测试剂盒
荧光法L丙氨酸检测试剂盒
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Fluorimetric L-Alanine Assay Kit
200T
200T
适用仪器
荧光酶标仪 | |
Ex: | 540nm |
Em: | 590nm |
Cutoff: | 570nm |
推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备测试样品以及连续稀释的L-丙氨酸标准品(50 µL)
2.加入等体积的L-丙氨酸工作溶液(50 µL)
3.在37°C下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Quest Fluor L-丙氨酸传感器储备溶液(200X):
将55 µL DMSO(组分E)添加到Quest Fluor L-丙氨酸传感器(组分A)中,制成200X Quest Fluor L-丙氨酸传感器储备溶液。
1.2 L-丙氨酸标准溶液(1 mM):
将10 µL 100 mM L-丙氨酸(组分D)加到990 µL PBS(pH 7.0)中,得到1 mM L-丙氨酸溶液。
2.标准溶液
L-丙氨酸标准
向900 µL PBS中加入100 µL 1 mM L-丙氨酸标准溶液,制成100 µM L-丙氨酸溶液(AS7)。进行1:2连续稀释以获得连续稀释的L-丙氨酸标准品(AS6-AS1)。
3.工作溶液
3.1 将5 mL测定缓冲液(组分C)加入一瓶酶混合1瓶(组分B1)中,并充分混合。
3.2 将100μLddH2O加入一个酶混合物2小瓶(组分B2)中并充分混合。
3.3 将整个小瓶(100μL)的Enzyme Mix 2和25 uL的200X L-丙氨酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中; 混合均匀。 注意:工作解决方案不稳定。 立即使用,避免直接暴露在光线下。
样品操作及实验分析
表1.黑色96孔微孔板中L-丙氨酸标准品和测试样品的布局。 AS = L-丙氨酸标准品(AS1-AS7,1.5至100 µM); BL =空白对照; TS =测试样品。
BL | BL | TS | TS |
AS1 | AS1 | ... | ... |
AS2 | AS2 | ... | ... |
AS3 | AS3 | ||
AS4 | AS4 | ||
AS5 | AS5 | ||
AS6 | AS6 | ||
AS7 | AS7 |
表2.每个孔的试剂组成
孔 | 容积 | 试剂 |
AS1-AS7 | 50ul | 连续稀释(1.5至100 µM) |
BL | 50ul | 1X PBS缓冲液 |
TS | 50ul | 测试样品 |
1.根据表1和表2提供的布局,准备L-丙氨酸标准品(AS),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂代替50 µL。
2.将50 µL L-丙氨酸工作溶液添加到L-Alanine标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,以使L-Alanine测定的总体积为100 µL /孔。 对于384孔板,将25 µL L-丙氨酸工作溶液添加到每个孔中,总体积为50 µL /孔。 注意:在pH 6.5至7.0下运行L-丙氨酸测定。
3.将反应混合物在37°C孵育30分钟至1小时。
4.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm(截止:570 nm)下监测荧光的增加。
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参考文献
Reactivity of beta-m ethylamino-L-alanine in complex sample matrixes complicating detection and quantification by mass spectrometry
Authors: Glover WB, Liberto CM, McNeil WS, Banack SA, Shipley PR, Murch SJ.
Journal: Anal Chem (2012): 7946
Synthesis and characterization of silver/alanine nanocomposites for radiation detection in medical applications: the influence of particle size on the detection properties
Authors: Guidelli EJ, Ramos AP, Zaniquelli ME, Nicolucci P, Baffa O.
Journal: Nanoscale (2012): 2884
Detection of farnesyltransferase interface hot spots through computational alanine scanning mutagenesis
Authors: Perez MA, Sousa SF, Oliveira EF, Fernandes PA, Ramos MJ.
Journal: J Phys Chem B (2011): 15339
Molecular beacon based bioassay for highly sensitive and selective detection of nicotinamide adenine dinucleotide and the activity of alanine aminotransferase
Authors: Tang Z, Liu P, Ma C, Yang X, Wang K, Tan W, Lv X.
Journal: Anal Chem (2011): 2505
Highly specific substrates of proteinase 3 containing 3-(2-benzoxazol-5-yl)-l-alanine and their application for detection of this enzyme in human serum
Authors: Wysocka M, Lesner A, Guzow K, Kulczycka J, Legowska A, Wiczk W, Rolka K.
Journal: Anal Chem (2010): 3883
In-capillary derivatization and stacking electrophoretic analysis of gamma-aminobutyric acid and alanine in tea samples to redeem the detection after dilution to decrease matrix interference
Authors: Su YS, Lin YP, Cheng FC, Jen JF.
Journal: J Agric Food Chem (2010): 120
SAFETY study: alanine aminotransferase cutoff values are set too high for reliable detection of pediatric chronic liver disease
Authors: Schwimmer JB, Dunn W, Norman GJ, Pardee PE, Middleton MS, Kerkar N, Sirlin CB.
Journal: Gastroenterology (2010): 1357
[Rapid detection of alanine aminotransferase with near-infrared spectroscopy]
Authors: Huang FR, Zhang J, Luo YH, Li SP, Zheng SF, Chen XD.
Journal: Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi (2010): 2620
An electrochemical biosensor array for rapid detection of alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase
Authors: Song MJ, Yun DH, Hong SI.
Journal: Biosci Biotechnol Biochem (2009): 474
Detection of the mitochondrial and catalytically active alanine aminotransferase in human tissues and plasma
Authors: Glinghammar B, Rafter I, Lindstrom AK, Hedberg JJ, Andersson HB, Lindblom P, Berg AL, Cotgreave I.
Journal: Int J Mol Med (2009): 621