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上海伯易生物
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靶向代谢组
靶向代谢组学
靶向代谢组学(Targeted metabolomics):针对几种目标化合物或某条通路上涉及的全部或部分代谢物,利用标准品,构建特异性强、灵敏度高、重复性好的检测 方法,对目标化合物进行定量与分析。
原理
靶向代谢组学实验流程
基于 LC-MS/GC-MS 技术,采用目标化合物标准品进行方法优化、方法验证、生 物样本收集、代谢物提取、质谱检测、数据分析等。
我们可以对中心碳代谢的多个通路中共220种代谢物进行靶向检测,还可针对胆汁酸代谢、氨基酸代谢、内源性DA麻素类、神经递质类、维生素类、卡尼汀类、植物次生代谢产物以及短链脂肪酸类等进行靶向检测。
关于样品
1.微生物和细胞样本:迅速钝化代谢活动(淬灭),同时保持细胞不裂解
2.动物体液(如尿、血、组织、器官、唾液):采样后要迅速预处理,如加入抗凝血剂、防腐剂,并立即冷冻处理(-80℃)
3.植物样本:采集后迅速冷冻(液氮),然后转入-80℃保存,200mg/例。
4.血清样品:500ul/例(不得低于200ul/例),一定避免反复冻融。(血液收集在离心管中静置30分钟进行凝固。然后离心取上清装载干净的离心管中,再离心5分钟,8000rpm,取上清分装到冻存管中,每管0.5ml,-80℃冻存寄送。)
5.尿液样品:1ml/例,原则上可以多取一点(尿液直接分装到离心管中,每管1ml,添加一滴(约10ul)质量体积为1/100(w/v)的NaN3,-80℃冻存寄送)
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文献和实验代谢组学的研究目标是尽可能对生物系统中所有代谢物进行定性和定量的分析,是研究代谢物谱、代谢表型、代谢变化、代谢途径和发现生物标志物强大的分析工具。色谱-质谱联用技术整合了色谱的高效分离能力和质谱的强大分析功能,具有灵敏度高、选择性好、动态范围宽、信息丰富等优点,已成为代谢组学研究最常用的分析技术,能够在单次分析中获得数千种代谢物的信息,在血液、尿样和细胞等生物样品的代谢组学分析中占据重要地位。 然而,对于结构复杂和异质性高的生物组织或器官中的代谢物分析,色谱质谱联用分析方法具有局限性,原因
质谱成像(Mass Spectrometry Imaging, MSI)作为一种新型的分子影像技术,能够直接从生物组织中获得大量已知或未知的内源性代谢物和外源性药物等分子的结构、含量和空间分布信息。相对于其他成像方法(如荧光成像、放射性标记成像等),该技术无需化学或放射性标记、不需复杂样品前处理,具有高特异性、高通量和空间信息保留的突出优势。 质谱成像技术可以实现生物组织中上千代谢物的定性、定量和定位分析,结合生物信息学分析,发展为空间代谢组学方法,可从生物组织原位发现差异代谢物,并识别其生物
沉默、基因敲除后代谢物变化的机制研究,了解基因与代谢物之间的精确关系等; 植物与环境互作研究,如昆虫选择性侵害植物部位、土壤与根部互作研究等; 植物药用成分定位; 7.空间成像的分辨率和定性的准确性哪个更重要? 两个都重要。空间分辨率并非越高越好,要选择能够满足自己研究目的,经费上又可控的空间分辨率。空间代谢组主要解决的是代谢物的空间定位问题,通过非靶向的方式获得具有空间异质性分布的 m/z,后续针对目标 m/z 通过原位二级进行验证。 8.你们的 AFADESI-MSI 和 Waters










