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- 2025年11月07日
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我们生产的NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。
关于我们生产的不同的裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考附录。
NP-40裂解液的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
关于裂解液的选择，一方面可以参考我们生产的各种裂解液主要特点、差异，选择合适的裂解液；另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
对于培养细胞样品：
1. 融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
用于普通的Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P1001)，该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用，用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。
| 货号 | 产品名称 | 品牌 | 规格 | 价格（元） |
| P0910 | NP-40裂解液 | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
| P0160 | PMSF(100mM) | NobleRyder | 1/10ml | 30.00/100.00 |
| P0902 | RIPA裂解液(强) | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
| P0908 | RIPA裂解液(强中弱套装) | NobleRyder | 3*50ml | 280.00 |
| P0906 | RIPA裂解液(弱) | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
| P0904 | RIPA裂解液(中) | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
| P0912 | SDS裂解液 | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
| P0907 | Western及IP细胞裂解液 | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
| P0916 | 非变性细胞裂解缓冲液 | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
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文献和实验细胞裂解分析化学,论坛,化学分析,仪器分析,分析测试,色谱,电泳,光谱u5kLlIO T 采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质分析化学论坛~O/b:te} 相互作用，多采用非离子变性剂（NP40或Triton X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。 不能用高浓度的变性剂（0.2％SDS)，细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的cocktailer。 2、如何得到比较纯的包涵
降解测序。 五、注意事项 细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质相互作用，多采用非离子变性剂（NP40 或 Triton X-100）。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。不能用高浓度的变性剂（0.2％ SDS），细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的 cocktailer。 使用明确的抗体，可以将几种抗体共同使用。 使用对照抗体： ① 单克隆抗体：正常小鼠的 IgG 或另一类单抗 ② 兔多克隆抗体：正常兔
，比如 RIPA，虽然裂解剧烈，但是无法维持蛋白天然构象，会破坏互作蛋白对。 如果自配，建议采用温和系统，比如 NP40/Triton 0.1%-1%；SDS ≤0.1%，盐离子≤150 mM 记得要加蛋白酶和/或磷酸酶抑制剂 结合液---利于蛋白之间的相互结合，要考虑孵育（结合）顺序 如果抗体和 beads 先孵育，建议 选择 pH 8.2（更常用）或者 pH 5.0 如果选用纯抗原作为诱饵蛋白 X 去拉裂解液中的靶蛋白 Y，抗体和抗原的结合 buffer 选择中性PBS/TBS 如果诱饵蛋白 X
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