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- P0180
- 2025年11月08日
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诺博莱德
本公司供应化学试剂的5×蛋白上样缓冲液（含DTT），品质保证，欢迎洽谈。
产品简介：
本产品适用于SDS-PAGE(SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS，DTT，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。
SDS可与蛋白质结合使蛋白质－SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异，SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构，DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示电泳结束的时间。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
使用说明：
1．请按每40微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。
2．混匀后，100℃水浴加热3-5分钟，使蛋白变性。
3．冷却到室温后，离心数秒后，混均再离心30秒取上清直接上样即可。
注意事项：
8%胶时溴酚蓝大概在30kd左右，12%胶时，约在20kd左右，15%胶时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。
本试剂因含DTT，有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
| 货号 | 产品名称 | 品牌 | 规格 | 价格（元） |
| P0300 | 1.5M Tris-HCL(PH8.8) | NobleRyder | 100ml/500ml | 50.00/160.00 |
| P0220 | 10%过硫酸铵 | NobleRyder | 1ml | 15.00 |
| P0210 | 10×电泳转移缓冲液 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
| P0270 | 10×丽春红染液 | NobleRyder | 10ml | 90.00 |
| 丽春红S | ||||
| P0290 | 1M Tris-HCL (PH6.8) | NobleRyder | 100/500ml | 40.00/160.00 |
| P0230 | 30%丙烯酰胺/甲叉溶液（29:1） | NobleRyder | 100ml/500ml | 60.00/180.00 |
| P0250 | 4×SDS-PAGE分离胶缓冲液 | NobleRyder | 100ml/500ml | 60.00/180.00 |
| P0260 | 4×SDS-PAGE浓缩胶缓冲液 | NobleRyder | 100/500ml | 60.00/180.00 |
| P0235 | 40%丙烯酰胺/甲叉溶液（37.5:1） | NobleRyder | 100/500ml | 80.00/280.00 |
| P0180 | 5×蛋白上样缓冲液（含DTT） | NobleRyder | 1ml/10ml | 40.00/160.00 |
| P0170 | 5×蛋白上样缓冲液（配有β-巯基乙醇） | NobleRyder | 10ml | 120 |
| P0190 | 5×非变性蛋白上样缓冲液 | NobleRyder | 10ml | 100.00 |
| P0171 | 4×蛋白上样缓冲液（配有β-巯基乙醇） | NobleRyder | 10ml | 100.00 |
| P0200 | Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液（干粉） | NobleRyder | 10L | 180.00 |
| P0280 | 考马斯亮蓝快速染色液 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
| P1006 | 载体两性电解质PH3.5-10 | NobleRyder | 12ml | 580.00 |
| P0320 | 10%SDS | NobleRyder | 100ml | 48.00 |
| P0310 | 1M DTT | NobleRyder | 5ml | 60.00 |
| N0020 | 1M Tris-HCl（PH=8.0） | NobleRyder | 100ml/500ml | 40.00/160.00 |
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文献和实验-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集
我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
核蛋白提取： （1）5 millions个离心收集 （2）弃上清，细胞沉淀重悬于1.5ml冰预冷的PBS缓冲液，4℃下2000 rpm离心5min。 （3）弃上清，沉淀重悬于500μl冰预冷的Buffer A离心收集，再悬于0.5 ml Buffer A。 （4）冰上放置10分钟，加入NP40使终浓度为0.5%，混匀后，轻摇20秒。 （5）4℃下1330×g离心15分钟得到细胞核。 （6）重悬于50µl Buffer B，于冰上强烈振荡15分钟，4℃下16300×g离心10分钟
tris-Cl, PH 7.4, 0.25 mM DTT, 10 mM CaCl2；PAD 缓冲液：推荐配方为 0.1M tris-Cl, PH 7.4, 5 mM DTT, 10 mM CaCl2, 10 µg/µl aprotonin, 10 µg/µl leupeptin, 10 µg/µl pepstatin；4×Laemelli 样品缓冲液：推荐配方为 8% SDS，40% Glycerol，250 mM tris-Cl, PH 6.8，0.02% Bromophenol Blue
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