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- 信裕生物
- XY0726
- 中国
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
G418遗传霉素溶液 (Geneticin,20mg/mL)
- 保质期：
有效期24个月
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃ 避光保存，有效期24个月
- 规格：
10mL
产品简介
新霉素(geneticin, G418)又称遗传霉素，是一种氨基糖苷类抗生素, 是细胞稳定转染最常用的抗性筛选试剂。G418能阻断蛋白质合成，对细菌、酵母、高等植物以及哺乳动物细胞均具有氨基糖苷类毒性，用于真核细胞从转座子Tn5和Tn601稳定转染新霉素(neo)抗性基因的选择和维持。经常用于基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面。
G418溶液经过滤除菌，一般工作浓度为50～1000ug/ml不等，然而不同类型的细胞需要根据实验确定最佳浓度。在具有相对稳定基因组的细胞(如CHO细胞)中，一旦筛选出稳定细胞株后，无需加入G418继续培养。
Phygene G418溶液主要由G418、HEPES等组成，过滤除菌。
G418溶液已经0.22μm抽滤除菌，可以直接使用。
| 细胞系或机体 | G418推荐浓度（μg/ml） |
| 中国仓鼠卵巢细胞 | 700-800 |
| Madin-Darby犬肾细胞 | 500 |
| 人上皮A431细胞 | 400 |
| 猿CV-1细胞 | 500 |
| 盘基网柄菌属 | 10-35 |
| 植物 | 10 |
| 酵母 | 125-500 |
操作步骤 （仅供参考）
1、 由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同批次的G418的活性液不同，所以在筛选之前，需要确定G418的最佳筛选浓度，一般在50～1000μg/ml 范围内进行筛选。
2、 将细胞制备成细胞悬液，并稀释到1000个/ml。
3、 加入不同量的G418 solution (20mg/ml)，选择在10~14天内使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。
注意事项
1、 尽量减少反复冻融的次数，以免失效。
2、 基因转染到细胞内要一段时间才能表达出蛋白质, 所以筛选不能太早。
3、 筛选也不宜太迟，一般要在转染24h之后才开始加G418筛选。因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，最终导致筛选不出阳性克隆。
4、 随着细胞代谢，G418的浓度和活性都会下降，应每3~5天更换一次含有G418的筛选液，这时药物浓度可以降至200μg/ml。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验染色1. 此实验步骤针对固定细胞β-gal表达的检测。这是用来确定转染效率的方便快捷的方法。此方法在6孔板上进行，由Sanes的方法修正而来。对于不同大小的培养器皿，根据培养板的表面积比来扩大或缩小溶液的量。此步骤可以用于悬浮细胞。使用2×106转染的细胞（来自6孔板转染），轻轻将细胞离心下来，使用和培养板上润洗细胞相同的方法。轻柔地处理细胞，不能振荡，并以尽可能低的速度离心。贮液：20mg/ml的X-gal溶解于二甲亚砜（－20℃，贮存于聚丙烯试管中，避光）。注意：用玻璃移液管或者聚丙烯吸头
可以用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。该方法往往被用于贴壁细胞的转染，也是最好的方法。 1. 试剂的配制 (1)2×HBS 1.63 g NaCl ；1.19g Hepes；0.023 g Na2 PO4 ·2H2 O；加水至100 ml pH 7.1 过滤，4℃保存 (2)2mmol/L CaCl2 过滤除菌 (3)TE：0.1mmol/L EDTA，1mmol/L Tris-HCL PH 8.0 (4)G418(新霉素G418)液：1g G418溶于
Multiwell Transformation Protocol
Geneticin (Gibco BRL 11811-031) 10 mg/ml sheared salmon sperm DNA (Boehringer Mannheim 1467 140) YPD broth DMSO (Sigma ) Protocol Two days beforehand: 1. Make YPD geneticin plates
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