G418遗传霉素溶液 (Geneticin,20mg/mL)

G418遗传霉素溶液 (Geneticin,20mg/mL)
产品简介 

新霉素(geneticin, G418)又称遗传霉素，是一种氨基糖苷类抗生素, 是细胞稳定转染最常用的抗性筛选试剂。G418能阻断蛋白质合成，对细菌、酵母、高等植物以及哺乳动物细胞均具有氨基糖苷类毒性，用于真核细胞从转座子Tn5和Tn601稳定转染新霉素(neo)抗性基因的选择和维持。经常用于基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面。 


G418溶液经过滤除菌，一般工作浓度为50～1000ug/ml不等，然而不同类型的细胞需要根据实验确定最佳浓度。在具有相对稳定基因组的细胞(如CHO细胞)中，一旦筛选出稳定细胞株后，无需加入G418继续培养。

Phygene G418溶液主要由G418、HEPES等组成，过滤除菌。


G418溶液已经0.22μm抽滤除菌，可以直接使用。


 

细胞系或机体	G418推荐浓度（μg/ml）
中国仓鼠卵巢细胞	700-800
Madin-Darby犬肾细胞	500
人上皮A431细胞	400
猿CV-1细胞	500
盘基网柄菌属	10-35
植物	10
酵母	125-500

操作步骤 （仅供参考）

1、 由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同批次的G418的活性液不同，所以在筛选之前，需要确定G418的最佳筛选浓度，一般在50～1000μg/ml 范围内进行筛选。
2、 将细胞制备成细胞悬液，并稀释到1000个/ml。
3、 加入不同量的G418 solution (20mg/ml)，选择在10~14天内使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。

注意事项 

1、 尽量减少反复冻融的次数，以免失效。 
2、 基因转染到细胞内要一段时间才能表达出蛋白质, 所以筛选不能太早。 
3、 筛选也不宜太迟，一般要在转染24h之后才开始加G418筛选。因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，最终导致筛选不出阳性克隆。 
4、 随着细胞代谢，G418的浓度和活性都会下降，应每3~5天更换一次含有G418的筛选液，这时药物浓度可以降至200μg/ml。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。