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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
55
- 英文名:
YSRIBIO-C5331
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
500ml
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:凝胶蛋白质蓝染-脱色液(考马斯亮蓝染色脱色液)哪家好
英文名称:
产品规格:500ml
发货周期:1~3天
产品保存室温保存,一年有效。
产品说明本脱色液用于考马斯亮蓝染色液染色后的脱色,可与我公司的凝胶蛋白质蓝染染色液配套使用。
使用方法
1.电泳结束后,取凝胶放入蒸馏水中,摇床摇动5-10分钟,以去除盐及SDS等干扰物质。
2.弃蒸馏水,加入适量的染色液,以浸没凝胶为宜。
3.至摇床上缓慢摇动,室温染色一小时或更长时间。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,可以认为已染色充分。
注意如若需加快染色,可微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾(尽量避免沸腾,以免胶破裂),立即停止加热,放置摇床上摇动数分钟。
4.倒出染色液(染色液一般可以重复利用2-3次),加入适量的蒸馏水洗涤凝胶。
5.加入脱色液,放在摇床上摇动,其间需更换脱色液,直至凝胶背景清楚为止。
注意如若需加快脱色,可微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾(尽量避免沸腾,以免胶破裂),立即停止加热,放置摇床上摇动数分钟(如若背景或条带不理想可更换脱色液并重复此步骤),直到背景干净或条带清晰。
6.放入含有20%甘油的水溶液中保存。
常见问题常规染色脱色方法耗时较长,但检测灵敏度更高,染色效果更加稳定。在微波炉加热的过程中有时会出现暴沸导致凝胶碎裂的情况,需特别注意。
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
DECAMETHYLTETRASILOXANE十四硅141628
Notoginsenoside Ft1三七皂苷Ft1
LHomoserineL高丝672151
2,3,5,6TETRAMETHYL1,4PHENYLENEDIAMINE四对3102872
3(ACRYLOYLOXY)PROPYLTRIMETHOXYSILANE3三硅4369146
Tetradecylthioacetic acid十四代2921202
griffonin紫草苷63492693
Cyclopropanecarbonitrile环5500210
3Fluoro4methylphenylboronic acid34168267990
Lithium bromide溴锂7550358
Pyridine methanesulfonate39879602
Hordenine大麦芽539151
Ethyl 2bromohexanoate2溴615963
PROPYLMAGNESIUM CHLORIDE镁2234824
Isobutyric anhydride异97723
Marker III 含量: 规格:5 mg/支
Pfu DNA聚合酶 含量: 规格:5 mg/支
Pfu DNA Polymerase 含量: 规格:5 mg/支
Polybrene (hexadimethrine bromide)CAS No:28728554 含量: 规格:5mg/支
Polybrene (hexadimethrine bromide) 含量: 规格:20mg/支
pUC19/MspI 含量: 规格:20 mg/支
SYBR Green I 含量:≥ 98% 规格:20 mg/支
Taq DNA聚合酶 含量:≥ 98% 规格:20 mg/支
凝胶蛋白质蓝染-脱色液(考马斯亮蓝染色脱色液)哪家好Amikacin48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
AmilorideHydrochloride48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620HPLC≥96%
AminobenzoatePotassium48T/96T进口、国产1620HPLC≥96%
AminobenzoateSodium48T/96T进口、国产1620S-Allyl-L-CysteineHPLC≥98%
AminobenzoicAcid48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
Aminobutanol48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
操作步骤(仅供参考):
1、凝胶蛋白质蓝染-脱色液(考马斯亮蓝染色脱色液)哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验,1970)。2D―PAGE模式可以通过超敏感染色方法,如考马斯亮蓝染色(Neuhoff等,1988)、银染(Rabilloud,1990)或负离子锌染(Fernandez―Patron,Castellanos-Serra和Rodriguez,1992)等,使蛋白质永久地显现出来。得到的二维聚丙烯酰胺染色胶可以数字化,并且可以计算分析。已经发展了很多图像分析程序来完成这项任务,如2D―PAGE图像可视化、斑点检测、斑点定量化、图像和斑点匹配、图像比较、聚类分析和数据管理。这些年来已经开发了很多软件
用考马斯亮蓝 R - 250 染色 1. 凝胶的固定液中轻微摇荡至少 1 小时。 2. 凝胶在染色液中摇荡过夜或至少 1 小时。 3. 胶在脱色液中摇荡过夜或至少 1 小时以消除背景。 4. 凝胶放于保存液中至少 4 小时以进一步脱色。在最初的 1 小时内换两次溶液
0:05 无有机溶剂和醋酸时蛋白质凝胶的考马斯亮蓝G-250染色法5 0:21 内容订阅21 1:02 内容简介62 1:34 配制考马斯亮蓝染色溶液94 2:38 SDS-PAGE电泳158 4:26 凝胶染色266 6:38 代表性实验结果398 7:19 结论439 无有机溶剂和醋酸时蛋白质凝胶的考马斯亮蓝G-250染色法本视频来源于网络,如有异议请联系我们,我们将在5个工作日内作出处理。
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