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- 上海研生
- YSRIBIO-C5330
- 进口、国产
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
54
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
1盒
英文名称：
产品规格：1盒
发货周期：1～3天
产品规格
染色液100ml
脱色液400ml
产品保存室温保存，一年有效。
产品说明
此试剂盒是以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE蛋白电泳胶的快速染色，或免疫印迹转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。可以检测到低达10ng的蛋白电泳条带。
使用方法
1．电泳结束后，取凝胶放入蒸馏水中,摇床摇动5-10分钟,以去除盐及SDS等干扰物质。
2．弃蒸馏水，加入适量的染色液，以浸没凝胶为宜。.
3．至摇床上缓慢摇动，室温染色一小时或更长时间。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，可以认为已染色充分。
4．倒出染色液(染色液一般可以重复利用2-3次)，加入适量的蒸馏水洗涤凝胶。
5．加入脱色液，放在摇床上摇动，其间需更换脱色液,直至凝胶背景清楚为止。
注意如若需加快脱色，可微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾(尽量避免沸腾，以免胶破裂)，立即停止加热，放置摇床上摇动数分钟(如若背景或条带不理想可更换脱色液并重复此步骤)，直到背景干净或条带清晰。
6．放入含有20%甘油的水溶液中保存。
常见问题
1.无染色条带或条带较弱，可能上样量少，建议跑电泳时加两个不同量的BSA的泳道作为阳性对照。
2.本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
3.背景太高可能杂质没有除尽，建议延长洗涤时间或增加洗涤次数。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：1．凝胶蛋白质蓝染试剂盒(考马斯亮蓝染色液和脱色液)价格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验ml，溴酚蓝0.5g，SDS l0g，溶于水，用HCI调PH至8.0，定容至500ml。( 11)脱色液 甲醇：乙酸：水＝5：1 ：5（体积比）( 12)染色液（0.25%考马斯亮蓝R250）1.00g考马斯亮蓝R250，用脱色液400ml溶解，过滤备用。( 13)低分子质量标准蛋白溶液，包括溶菌酶（MW=14400Da）大豆胰蛋白酶抑制剂（215000）、碳酸酐酶（310000）、卵白蛋白（450000）、牛血清白蛋白 (662000）、磷酸化酶B (925000）。用样品缓冲液配成2mg/ml
乙醇，0.05g溴酚兰，10g蔗糖，加水定容至100ml。 8．考马斯亮蓝染色液：0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。 9．脱色液：90ml甲醇:水（1:1）和10ml冰醋酸配成100ml脱色液 10．Tris-甘氨酸电泳缓冲液（pH8.3）：在900ml去离子水中溶解15.1gTris碱，94g甘氨酸，加入50ml10％（W/V）的电泳级SDS贮液，用去离子水补至1000ml量则成5×贮液
，染色，脱色，制干板 （1）pH梯度的检测 从胶板上顺电场方向切下一条胶条，并切成0.5cm等距离的小块，顺序放入小试管内，加入0.5ml重蒸水，浸泡10min。用pH试纸或微电极测定pH值，或以表面微电极直接测定pH梯度，并绘制PH-cm图谱。也可以用已知pI蛋白样品所在位置的距离与pI值绘图。 （2）固定染色 ● 将凝胶取下，放入固定液中固定4h，或过夜（换一次固定液）。 ● 去掉固定液，用脱色液漂洗一次。 ● 将染色液倒入培养皿内，染色30min。 一定注意取胶时
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