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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
22
- 英文名:
Propidium Iodide
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
5mg|20mg
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:碘化丙啶哪家好
英文名称:Propidium Iodide
产品规格:5mg|20mg
发货周期:1~3天
本品常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测,常用于流式细胞仪分析。
分子式C27H34I2N4
分子量668.40
纯度>95%
储存条件4℃避光。
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
10-(2,5-二羟基)-10H-9-氧杂-10-磷杂菲-10-物四三锰/黑锰矿/辉锰/锰/Manganese tetroxide
5-氨基间苯二酸二酯碳酸锰/碳酸亚锰/锰白/Manganous carbonate
N-Boc-5-氧基吲哚硫酸锰/硫酸亚锰/一水硫酸亚锰/Manganous sulfate monohydrate
D-3-溴苯氨酸二锰/锰(Ⅳ)/过锰/Manganese dioxide
白屈菜酸酸银/醋酸银/Silver acetate
四基氟铵硫酸银/Silver sulfate
3-酸偏钒酸银/Silver metavanadate
4-溴吲哚酮化银/Silver iodide
7-硝基-1,2,3,4-四异盐酸盐碳酸银/Silver carbonate
2-羟基-5-硝基-3-三氟基吡啶溴化银/Silver bromide
碘化丙啶哪家好α-Hydroxyisobutyric acid2-羟基-2-基100克色固
α-Glycerophosphate disodium salt hexahydrateα-甘油磷100克实用级
α-Glycerophosphate dehydrogenase3-磷甘油脱酶1克BR,300u/mg,粉末
α-Galactosidase preparation from green coffee beansα-D-半糖苷半糖水解酶5克标准品,7万u/mg
α-D-Lactose monohydrateα-糖500U高,
α-cyclodextrinα-环糊精1KU超,99%
α-Bromoisobutyric acid2-溴-2-基25克99%
α-Amylase from Aspergillus oryzae高峰淀粉酶100克生物技术级,50u/mg
Zymosan A from Saccharomyces cerevisiae酵母多糖A25微克BR,99%
Z-Ser-OHN-羰基-L-丝25克
Z-ONSu基-N-琥珀酰亚基酯1克BR,99%
Z-L-IsoleucineN-羰基-L-异亮25克BR,
Z-Leu-OHN-羧基-L-亮100克,有害品
Z-L-aspartic acidN-羰基-L-天冬10克99%
Z-L-AlanineN-CBZ-L-5克98.5%
操作步骤(仅供参考):
1、碘化丙啶哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验碘化丙啶染色1.原理 碘化丙啶(propidium iodide,PI)不能穿人完整的活细胞膜中,即正常细胞和凋亡细胞在不固定的情况下对PI拒染,而坏死细胞由于失去膜的完整性,PI可进入细胞内与DNA结合,根据此特点,使用PI染色可鉴别死细胞。如果对活细胞染色必须在染色前进行固定,以增加细胞膜对染料的通透性。2.溶液配制 使用0.01mol/LPBS(pH 7.4)配制终浓度为0.5mg/ml的PI工作液。3.染色程序(1)单层细胞培养标本经预冷70%乙醇固定1小时,4℃;(2)0.01
组织中的细胞周期和凋亡检测方法之一--PI法schoman无论是肿瘤或其它正常新鲜组织均可用PI(碘化丙啶)的方法来检测,这是一种常见而且便宜的方法。主要操作步骤如下:1、组织块用0.25%胰酶消化30min-1h。2、200-400目筛网过滤细胞,获得单细胞悬液。3、75%乙醇(-20度预冷)固定细胞1h。4、加入PI(终浓度50ug/ml)和无DNA酶污染的RNA酶(终浓度50ug/ml)1ml染色30min-1h。5、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。注意事项: 1、组织消化后使细胞
FACS用于研究细胞组分DNA,碘化丙啶(PI)嵌入核酸双链中并可以发荧光。它不能进入活细胞,但是可以进入正在或者已经死亡的细胞。因此PI可以用于免疫荧光染色来鉴定死细胞。DNA染色可以用于研究细胞周期。相对的DNA含量可以坚持G1,G2和S期细胞的比例。在DNA染色中凋亡的细胞有特有的颜色。一、材料和试剂 1. TritonX-100(SigmaCatalogNo.T9284)2. 碘化丙啶(SigmaCatalogNo.P-4170)3. 乙醇 4. RNaseA
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