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- 上海研生
- YSRIBIO-C5326
- 进口、国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
1包
1．PVDF膜(进口分装),0.45μm,13.5cm×10cm,10张/包价格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：PVDF膜(进口分装),0.45μm,13.5cm×10cm,10张/包价格英文名称：
产品规格：1
发货周期：1～3天
产品规格0.45μm13.5cm×10cm/张10张/包
产品保存室温干燥保存，一年有效。
产品简介0.45μm的PVDF膜主要用于(＞20KD〕免疫印迹，吸附分析、氨基酸分析、N端蛋白质测序、Dot/Slotblotting、糖蛋白显色和脂多糖分析。膜与湿式和半干式电印迹系统兼容。
注意事项
1.凝胶电泳后，将胶在转移缓冲液中平衡10分钟(对于厚度大于0.75mm的凝胶，20分钟)。
2.将平衡的凝胶与湿膜直接接触，去除凝胶和膜之间可能形成的气泡。
3.将膜/凝胶三明治放入电印迹装置中。根据您的具体应用进行印迹程序。
4.为了增强膜与高分子量蛋白质的结合，延长转移时间并在转移缓冲液中加入低浓度的SDS(<0.01%w/v)。
5.膜转印完之后如需要染色剂染色，需要用甲醇浸润15秒之后再染色。
需要材料
1.膜切割成凝胶的尺寸
2.甲醇润湿干膜
3.纯水
4.转移缓冲液用于湿转的25mMTris，192mM甘氨酸，pH8.3,10%甲醇或用于半干转移的48mMTris，39mM甘氨酸，pH9.2,10%甲醇
5.将滤纸片切割成凝胶的尺寸并浸泡在转印缓冲液中至少30秒
6.含有0.5-5%(w/v)(牛血清白蛋白，酪蛋白，脱脂奶粉)的封闭液
7.洗涤缓冲液含有0.05-0.1%Tween-20的PBS或TBS
PBS10mM磷酸钠，pH7.2，0.9%NaCl
TBS10mMTris，pH7.4，0.9%NaCl
8.在封闭缓冲液或洗涤缓冲液中稀释的一抗
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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L(+)Arabinose 含量：>99% 规格：20mg/支
L 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
LAlanine 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
镧 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
Lanthanum Acetate 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
L精 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
LArginine 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
PVDF膜(进口分装),0.45μm,13.5cm×10cm,10张/包价格Albuterol48T/96T进口、国产1620AcetylcysteineHPLC≥98%
AlbuterolRelatedCompoundA48T/96T进口、国产1620AcetyltributylCitrateHPLC≥98%
AlcoholDetermination--Alcohol48T/96T进口、国产1620AcetyltriethylCitrateHPLC≥98%
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Alcohol48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
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文献和实验别的是蛋白上连续的几个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时用于免疫组化和 Western，而如果抗体识别构象形表位，则只能用于免疫组化。一般抗体说明书上都有注明此种抗体识别的氨基酸区间。（限于单抗）W. Western Blot 中抗体的重复应用问题解答：抗体工作溶液一般不主张储存反复使用，但是如抗体比较珍贵，可反复使用2－3次。稀释后应在2－3天内使用，4度保存，避免反复冻融。4. 滤纸、胶和膜的问题X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龙膜怎样鉴别？解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种
斯亮兰染色否可以ECL检测稍差可以快速免疫检测否可以SDS存在下蛋白质结合差好质谱分析否可以(尼龙膜和NC膜的特点相似,主要用于核酸杂交)b)膜的大小: 请根据胶的面积来确定.c)膜的孔径: 0.45μm适用一般蛋白质.0.2μm适用小分子蛋白质.购买信息:66485硝酸纤维素膜,0.45um,30cmX3m/卷美国Gelman1395元/卷 硝酸纤维素膜,0.45um,20cmX20cm美国Gelman80元/张 硝酸纤维素膜,0.45um,20cmX20cm国产30元/张60207尼龙
4. 滤纸、胶和膜的问题 X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龙膜怎样鉴别？ 解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型；硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物，价格最便宜；PVDF膜介于二者之间。 就结合能力而言：尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480－600μg/cm2，可结合短至10bp的核酸片段；硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80－100μg/cm2，对于200bp的核酸片段结合能力不强；PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125－300
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