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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
23
- 英文名：
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50次
培养操作步骤：
1．Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒规格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒规格
英文名称：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
产品规格：50次
发货周期：1～3天
本试剂盒是一种采用AnexinV-FITC与PI双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。AnexinV具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶(PropidiumIodide，PI)不能通过完整的活细胞，但能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色，因此通常将AnexinV与PI配合染色，以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。
操作步骤
1、细胞样品的准备
a．对于贴壁细胞小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
b．对于悬浮细胞1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
2、用去离子水按13稀释BindingBuffer(4mlBindingBuffer+12ml去离子水)。
3、用250μlBindingBuffer重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml。
4、取100μl的细胞悬液于5ml流式管中，加入5μlAnexinV/FITC和10μl20μg/ml的PI溶液。
5、混匀后于室温避光孵育15分钟。
6、在反应管中加400μlPBS，流式细胞仪(FACS)分析。
储存条件2～8℃，避光保存
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
3-基-2-(4-苯基)酸卡尔费休试剂（含吡啶）/卡氏试/Karl Flscher reagent
甘氨酸亚铁卡尔费休试剂（不含吡啶）/卡氏试/Karl Flscher reagent
2,6-二溴吡啶-4-羧酸溴化钠/钠臭/Sodium bromide
4-溴-5--2-氟/基代苯/苯基烷/苯/苯烷/Ethyl benzene
4-氨基-2-羟基嘧啶-5-羧酸酯1,3,5-三溴苯/均三溴苯/1,3,5,-三溴代苯/1,3,5-Tribromobenzene
磷酸三聚胺酒石酸钾钠/洛瑟尔氏盐/罗氏盐/洛瑟尔氏盐/四水合酒石酸钾钠/六氟二锆酸盐/罗谢尔盐/Potassium sodium tartrate tetrahydrate
4-吗啉碳酰亚硒钠/Sodium selenite pentahydrate
氨基腈硫酸盐酸锰/醋酸锰/酸亚锰/醋酸亚锰/四水合酸锰/Manganous acetate tetrahydrate
苯酰酸酯无水硫酸锰/无水硫酸亚锰/Manganese sulfate
2,3-二氧酸磷酸二锰/酸性磷酸锰/酸式磷酸锰/马日夫盐/磷酸锰/Manganous dihydrogen phosphate
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒规格Zirconyl chloride octahydrate二锆100克3N，0.1×50㎜
Zirconium hydroxide偏锆500克3N，200目
Zirconium dioxide二锆25克5N
Zincon5-(2-羧基基)-1-(2-羟基-5-基基)-3-基单盐250毫克BR，0.15%
Zinc sulfide闪矿1公斤98.5%
Zinc silicate荧光指示剂F25490毫升SP
Zinc phosphate tetrahydrate四水磷25克99%
Zinc phosphate monobasic磷二100克99%
Zinc lactate2-羟基100毫克高，
Zinc hydroxide1公斤GR，99.5%
Zinc Glycinate甘络合25克BR，99%
Zinc gluconate(T-4)-双(D-葡萄糖-κO1,κO2)-5UBR，
Zinc citrate枸橼10克分析标准品，
Zinc chloride25克超，99%
Zinc carbonate basic物25克40%
1．Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒规格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒规格英文名称：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
产品规格：50次
发货周期：1～3天
本试剂盒是一种采用AnexinV-FITC与PI双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。AnexinV具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶(PropidiumIodide，PI)不能通过完整的活细胞，但能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色，因此通常将AnexinV与PI配合染色，以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。
操作步骤
1、细胞样品的准备
a．对于贴壁细胞小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
b．对于悬浮细胞1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
2、用去离子水按13稀释BindingBuffer(4mlBindingBuffer+12ml去离子水)。
3、用250μlBindingBuffer重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml。
4、取100μl的细胞悬液于5ml流式管中，加入5μlAnexinV/FITC和10μl20μg/ml的PI溶液。
5、混匀后于室温避光孵育15分钟。
6、在反应管中加400μlPBS，流式细胞仪(FACS)分析。
储存条件2～8℃，避光保存
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
3-基-2-(4-苯基)酸卡尔费休试剂（含吡啶）/卡氏试/Karl Flscher reagent
甘氨酸亚铁卡尔费休试剂（不含吡啶）/卡氏试/Karl Flscher reagent
2,6-二溴吡啶-4-羧酸溴化钠/钠臭/Sodium bromide
4-溴-5--2-氟/基代苯/苯基烷/苯/苯烷/Ethyl benzene
4-氨基-2-羟基嘧啶-5-羧酸酯1,3,5-三溴苯/均三溴苯/1,3,5,-三溴代苯/1,3,5-Tribromobenzene
磷酸三聚胺酒石酸钾钠/洛瑟尔氏盐/罗氏盐/洛瑟尔氏盐/四水合酒石酸钾钠/六氟二锆酸盐/罗谢尔盐/Potassium sodium tartrate tetrahydrate
4-吗啉碳酰亚硒钠/Sodium selenite pentahydrate
氨基腈硫酸盐酸锰/醋酸锰/酸亚锰/醋酸亚锰/四水合酸锰/Manganous acetate tetrahydrate
苯酰酸酯无水硫酸锰/无水硫酸亚锰/Manganese sulfate
2,3-二氧酸磷酸二锰/酸性磷酸锰/酸式磷酸锰/马日夫盐/磷酸锰/Manganous dihydrogen phosphate
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒规格Zirconyl chloride octahydrate二锆100克3N，0.1×50㎜
Zirconium hydroxide偏锆500克3N，200目
Zirconium dioxide二锆25克5N
Zincon5-(2-羧基基)-1-(2-羟基-5-基基)-3-基单盐250毫克BR，0.15%
Zinc sulfide闪矿1公斤98.5%
Zinc silicate荧光指示剂F25490毫升SP
Zinc phosphate tetrahydrate四水磷25克99%
Zinc phosphate monobasic磷二100克99%
Zinc lactate2-羟基100毫克高，
Zinc hydroxide1公斤GR，99.5%
Zinc Glycinate甘络合25克BR，99%
Zinc gluconate(T-4)-双(D-葡萄糖-κO1,κO2)-5UBR，
Zinc citrate枸橼10克分析标准品，
Zinc chloride25克超，99%
Zinc carbonate basic物25克40%
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