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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
56
- 英文名:
EDTA Antigen Retrieval Solution
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100ml
1.EDTA抗原修复液(50X)哪家好用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称:EDTA抗原修复液(50X)哪家好英文名称:EDTA Antigen Retrieval Solution
产品规格:100ml
发货周期:1~3天
本品是一种常用的抗原修复液,可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
细胞或组织用、甲醛或其它醛类试剂固定后,会导致蛋白之间的交联(cross-link),从而遮蔽样品的抗原位点,导致免疫染色时染色信号减弱,甚至出现一些假阳性染色结果。
本抗原修复液采用了广泛使用的EDTA,可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。
通常石蜡切片都需进行抗原修复处理,而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果,但对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善。特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时,可以考虑尝试进行抗原修复。从原理上来看,无论冰冻切片还是细胞爬片等,只要是用、甲醛或其它醛类试剂固定的样品,进行抗原修复都会有效去除蛋白之间的交联,充分暴露抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。
本产品特别适合用于石蜡切片,也可以用于冰冻切片等其它样品。
一个包装的本产品可以配制成5000毫升抗原修复液(1X)。按照每个片子需要10毫升抗原修复液(1X)计算,一个包装的本产品可以用于500个样品。
注意事项抗原修复过程可以使用的染色缸和染色架或邮寄夹进行操作。塑料染色缸、染色架和邮寄夹可以很好地耐受沸水浴,而玻璃染色缸需避免骤冷骤热导致的玻璃破碎。
储存条件4℃,有效期一年。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项:
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品:
1羟骈三唑一... LAmmonium tartrate 质量规格:>99%,BR
5巯... Potassium carbonate, anhydrate 质量规格:>98%,BR
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1,3,5三唑 Ammonium oxalate hydrate 质量规格:98~101%,BR
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KIF11/Eg5/TRIP5驱动蛋白样蛋白1抗体(状腺激素受体相互作用蛋白5)大鼠Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)ELISA试剂盒497198
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文献和实验失水形成白色絮状沉淀。 5.TE缓冲液 50mmol/l Tris—HCl pH7.0 5mmol/l EDTA 配法: lmol/l Tris—HCl pH7.4 10ml 0.5mol/l EDTA EDTA 蒸馏水稀释至 1000ml 6.RNase 10mg/ml 配法: 称取RNase溶解在10mmol/l Tris—HCl(PH7.5)和15mmol/L Tris—Hcl(PH7.5)和15mmol/lNacl落液中使之浓度为10mg/ml。100℃加温15分钟
物,使DNA在紫外光下发射很强的荧光。在溴化乙锭足够的情况下,荧光的强度正比于DNA的含量,这样就可以检测DNA的浓度。 一、材料 pUC19质粒,1.5ml塑料离心管,离心管架,透明胶带,防护眼镜 二、设备 微量移液器(20μl),高压灭菌锅,电泳仪,琼脂糖平板电泳装置,微波炉,紫外透射仪等。 三、 试剂 准备 1. TAE电泳缓冲液:50X储存液,pH
1、将如下试剂混合 Cy5+Cy3 probe 30 μl Poly d(A) (8mg/ml) 1 μl Yeast tRNA (4mg/ml) 1 μl Human C0t-1 DNA (10mg/ml) 1 μl 20x SSC 6 μl 50x Denhardt’液 1 μl 用microcon 30 filter 浓缩
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