Human IL-8 ELISA Kit

碧云天的Human IL-8 ELISA Kit (Human Interleukin-8 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白细胞介素8酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-8的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为31pg/ml，与人GR0、IP-10、MIP-1、MCP-1、MCP-2、MCP-3、I-309、小鼠KC等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
IL-8即白细胞介素-8(简称白介8)，又称趋化因子CXCL8，曾被命名为粒细胞趋化肽(GCP-1)和中性粒细胞激活肽(NAP-1)，是一种分子量在8-9kDa的肝素结合多肽，属于CXC细胞因子家族。人CXC细胞因子家族中大多都具有3-β-折叠/1-α-螺旋结构，在N端具有保守的谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(ELR)序列。在体内，IL-8主要以三种形式存在：单体、同源二聚体及与CXCL4/PF4组成的异源二聚体，其中IL-8单体活性最强。成熟的人IL-8与犬、猫及猪的IL-8具有65-69%的氨基酸同源性，在啮齿类动物中并不存在编码IL-8的基因。
G蛋白偶联受体CXCR1/IL-8RA和CXCR2/IL-8RB参与调解IL-8的功能活性。CXCR1分子量在45-50kDa之间，特异性识别IL-8，而CXCR2分子量在35-40kDa之间，几乎能够识别所有的CXC细胞因子。在IL-8浓度较低时，CXCR2即可与之结合，二者结合后主要调控细胞趋药性和促进MMP-9分泌。相反地，CXCR1只有在IL-8浓度较高时才能与之结合，结合后主要调控细胞的呼吸爆发和磷脂酶D2的激活过程。阻断CXCR2受体会导致白细胞粘附在活化的血管内皮处并向炎症部位迁移，而阻断CXCR1受体则会使得中性粒细胞的抗菌活性增强。另外，IL-8还能够与丝氨酸蛋白酶抑制剂A1/α-1抗胰蛋白酶形成复合物，从而阻止IL-8与CXCR1的结合。
除了促炎外，IL-8还参与新生血管生成以及癌症和动脉粥样硬化的发病过程。IL-8能够诱导血管内皮细胞上VEGF的表达，促进血管内皮细胞生长，从而促进新生血管生成。在动脉粥样硬化部位和心肌梗死患者的血液及脑脊液中IL-8浓度水平均有所上升。IL-8还能促进EMT过程，增强肿瘤细胞的侵袭和转移能力。
IL-8与CXCR1/2结合后，G蛋白偶联受体被激活，随后Gα亚基和Gβγ亚基分离，进而活化下游Ras-Raf-MEK-Erk,JNK1/c-JUN和p38信号通路。同时活化的G蛋白还能够诱导细胞内快速Ca²⁺通道激活，抑制腺苷酸环化酶的活性，从而导致cAMP浓度降低。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人IL-8的浓度，其原理见图1。人IL-8特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人IL-8会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人IL-8抗体后，生物素化抗人IL-8抗体与人IL-8结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人IL-8浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PI640-1	人IL-8抗体预包被板	8孔×12条
PI640-2	样品分析缓冲液	5ml
PI640-3	标准品稀释液	10ml
PI640-4	人IL-8标准品	2-4瓶
PI640-5	人IL-8生物素化抗体	10ml
PI640-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PI640-7	洗涤液(20X)	30ml
PI640-8	TMB溶液	10ml
PI640-9	终止液	5ml
PI640-10	封板膜(透明)	2张
PI640-11	封板膜(白色)	2张
—	说明书	1份

保存条件：
除标准品外，4℃保存6个月内有效。标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
不宜混用不同批号的试剂盒组份，每批次试剂盒均经过独立测试。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。