Human total MMP-1 ELISA Kit

碧云天的Human Total MMP-1 ELISA Kit (Human Total Matrix Metalloptoteinases-1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人基质金属蛋白酶1酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的MMP-1的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为148pg/ml，与人MMP-2、MMP-2、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-12、MMP-13、MMP-16、TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases, MMPs)属于肽链内切酶，因需要Zn²⁺和Ca²⁺作为辅助因子而得名。MMPs能够对细胞外基质中的组分进行降解，在胚胎形成、组织重构、伤口愈合、炎症反应、关节炎和肿瘤等多种生理病理过程中发挥重要作用。MMPs以酶原(Pro-MMPs)的形式分泌，在有机汞化物或蛋白酶的作用下被激活。组织金属蛋白酶抑制剂(Tissue Inhibitors of Metalloproteinases, TIMPs)、α2-巨球蛋白或一些金属离子螯合剂会抑制MMPs的活性。
基质金属蛋白酶1(Matrix Metalloproteinases 1, MMP-1)，又被称为间质胶原酶、脊椎动物胶原酶、成纤维细胞胶原酶和胶原酶Ⅰ，主要由成纤维细胞、软骨细胞、巨噬细胞、角质细胞、内皮细胞和成骨细胞产生。在EGF、白介素、TNF-α、cAMP和佛波醇酯的刺激下，MMP-1的产生会有所增加。在结构上，MMP-1包含450个氨基酸，其中N端的前肽结构域(约80个氨基酸残基)在激活时会被剪切除去，催化区域(162个氨基酸残基)具有Zn²⁺结合位点，此外还有16个氨基酸残基的连接肽和C端192个氨基酸残基的hemopexin-like区域。
在细胞外基质重构时，MMP-1在纤维胶原蛋白的降解过程中发挥重要作用。MMP-1涉及到许多会发生胶原蛋白降解的生物学过程，包括类风湿、关节炎、牙周病、肿瘤侵袭、血管再生、角膜溃疡、组织重构、炎症性肠病、动脉瘤和血管再狭窄等疾病。除此之外，MMP-1还能裂解酪蛋白、明胶、聚集蛋白聚糖、Pro-TNF和软骨连接蛋白等多种蛋白。因此，除了人们最初所发现的功能外，MMP-1可能还参与酶级联反应、细胞因子调节和细胞表面调控等过程。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人MMP-1的浓度，其原理见图1。人MMP-1特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人MMP-1会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人MMP-1抗体后，生物素化抗人MMP-1抗体与人MMP-1结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人MMP-1浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人MMP-1浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PM723-1	人MMP-1抗体预包被板	8孔×12条
PM723-2	样品分析缓冲液	5ml
PM723-3	标准品稀释液(5X)	10ml
PM723-4	人MMP-1标准品	2-4瓶
PM723-5	人MMP-1生物素化抗体	10ml
PM723-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PM723-7	洗涤液(20X)	30ml
PM723-8	TMB溶液	10ml
PM723-9	终止液	5ml
PM723-10	封板膜(透明)	2张
PM723-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。