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| 实验动物信息 | |
| 动物模型名称 | 慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型 |
| 动物种属品系 | SD大鼠 |
| 动物性别 | 雄性 |
| 动物年龄 | |
| 动物体重 | 190-230g |
| 模型制备信息 | |
| 模型分组 | 实验分两组:正常对照组和模型组。 |
| 模型方法 | |
| 实验周期 | 4周 |
| 模型评价 | 1.观察各组大鼠的活动量、毛发、食量、呼吸、体重等。每周给食前1h称重,观察体重的变化。 2.RT-qPCR检测 收集大鼠PBMC和肺组织,提取RNA,利用RT-PCR检测Foxp3、RORγT的表达。 3.Western blot检测 收集大鼠PBMC和肺组织,提取蛋白,采用western-blot检测TAZ水平。 4.流式细胞检测外周血T淋巴细胞亚群 收集各组大鼠腹主动脉血2ml左右,利用大鼠外周血淋巴细胞分离液提取外周血单个核细胞(PBMC)细胞悬液。 (1)检测Th17时,细胞悬液加入佛波酯(50ng/ml)、离子霉素(1μg/ml)和莫能菌素(2μmol/L),37℃、5%CO2培养箱终培养6h后,反复洗涤3次后100μL PBS重悬,然后加入CD4单克隆抗体10μL,混匀后4℃避光孵育30min,洗涤、固定、破膜,再加入IL-17单克隆抗体10μL,4℃避光孵育20min,反复洗涤后PBS重悬为500μL/管,样品置流式细胞仪检测CD4+IL-17+细胞占CD4+T细胞的比例。 (2)检测Treg细胞时,细胞悬液先加入CD4、CD25单克隆抗体各10μl,混匀后4℃避光孵育30min,洗涤、固定、破膜,再加入FoxP3单克隆抗体10μL,4℃避光孵育20min,反复洗涤后PBS重悬为500μL/管,样品置流式细胞仪检测CD4+CD25+FoxP3+细胞占CD4+T细胞的比例。 |
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慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型
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