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上海邦景
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产品名称:一次性针头式滤器(PES膜)直径25mm50个/盒0.2umPall图片
单位0.2um50个/盒
一次性针头式过滤器已是实验室常规使用的快速、方便、可靠的过滤工具,外形美观轻巧、洁净度高,主要用于样品预滤、澄清除颗粒、液体和气体的除菌过滤。是过滤HPLC、GC小量样品的方法。按灭菌方式可分为灭菌和非灭菌。
注意事项:
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测,反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质,在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水(1:9)稀释至 1×备用。
操作步骤:
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测:
染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
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文献和实验0.9,而CCD-扫描仪的数值孔径为0.2~0.5。有其他类型的扫描仪不用目镜而是使用积分球面镜来采集释放的部分光源,但是部分光线经过多次球面反射而衰减。还有一些无散光收集装置,仅仅是将探测器放在样品的某一区域的上方,光线采集的效率受限于样品被照明处的范围及探测器的视角,例如,一个直径为25mm的探测器放在激发点上方100mm处,其实际的有效数值孔径为0.12。图2显示目镜的不同数值孔径与光采集效率的关系。 图2 目镜的不同数值孔径与光采集效率的关系 空间定位 是指对样品上的某一小区域上的荧
调PH到7.2左右。最后定容至1 000 ml,摇匀。 2.安装蔡式滤器:安装时先装好支架,按规定放好滤膜,用螺丝将不锈钢滤器和支架连接好。然后卸下支架腿分别用布包好待消毒。 3.抽滤:配制好的培养液通常用滤器过滤除菌。通常用蔡式滤器在超净工作台内过滤。 4.分装:将过滤好的培养液分装入小瓶内置于4℃冰箱内待用。 5.使用前要向100 ml培养液中加入1 ml谷氨酰胺溶液(4℃时两周有效)。 (六)血清的灭活 细胞培养常用的是小牛血清,新
了我们规格,降低DC成分的干扰水平。立体过滤成分的去除,进一步改进了灵敏度。我们原先的设计有包括两个相配的聚焦镜的立体过滤器,小孔和不同的元件,这些如果组合在一起形成了共焦显微镜。但是我们发现光学共焦不能加强检测。事实上,镜头使干扰水平增加了两倍,这是由于自动的荧光性-整个装备导致了所需信号相当大的衰减,结果所有信噪比大大地减弱。我们因此推断在X轴方向的立体过滤在应用中没有起到作用。我们发现激光输出的清晰过滤对降低干扰是基本的。最后,为了达到可视成分的精细排列和精确的最佳聚焦,利用了刻度载玻片和软件
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