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一次性针头式滤器(PES膜)直径25mm50个/盒0.2um

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      上海邦景

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      低温冷藏

    • 规格

    产品细节图片1
    产品名称:一次性针头式滤器(PES)直径25mm50/0.2umPall图片
    单位0.2um50/

    一次性针头式过滤器已是实验室常规使用的快速、方便、可靠的过滤工具,外形美观轻巧、洁净度高,主要用于样品预滤、澄清除颗粒、液体和气体的除菌过滤。是过滤HPLCGC小量样品的方法。按灭菌方式可分为灭菌和非灭菌。
    注意事项:
    1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作。
    2. 反应完毕后请尽快检测,反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
    3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质,在操作时请注意避光。
    4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
    5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水(1:9)稀释至 1×备用。

    产品细节图片2
    操作步骤:
    1. 样品染色
    1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
    2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
    对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
    3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
    4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
    5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
    2. 样品检测
    1) 流式细胞仪检测:
    染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
    建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
    2) 荧光显微镜检测:
    染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。

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