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- 2025年07月12日
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详见说明书
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上海邦景
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低温冷藏
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个
单位0.45um50个/盒
一次性针头式过滤器已是实验室常规使用的快速、方便、可靠的过滤工具，外形美观轻巧、洁净度高，主要用于样品预滤、澄清除颗粒、液体和气体的除菌过滤。是过滤HPLC、GC小量样品方法。按灭菌方式可分为灭菌和非灭菌。
使用方法:
1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
SLBBroth
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一次性针头滤器0.45umPall价格豚鼠胚胎细胞;104C1
人肾上皮细胞RNAHREpiC miRNA5 μg
GPC5 Others Human 人 Glypican 5 / GPC5 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
ScaBER细胞，膀胱鳞癌细胞 人非小细胞肺腺癌细胞,NCI-H2087细胞 RN-h, 大鼠海马趾神经元
CL-0452T/G HA-VSMC(人血管平滑肌细胞)5×106cells/瓶×2
BST1 Others Human 人 CD157 人细胞裂解液 (阳性对照)
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
注意事项：
一次性针头滤器0.45umPall价格尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
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为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验一次性的可以过500ml没问题。 6.怎样检查滤膜是否合格 丁香园网友hkai97的观点为：正规做法是滤前滤后都做完整性试验。简单做法，如果是针头滤器，先用液体将滤膜浸湿，再用注射器向滤器打空气，如果空气不能穿过滤器，滤器就是好的。不要太简单！ 丁香园网友烟海沉浮的观点为： 滤前做完整性试验：此法适合针头滤器，如上所述，先用液体将滤膜浸湿，再用注射器向滤器打空气，如果空气不能穿过滤器，滤器就是好的。 像过滤培养液用大滤膜，做上面滤前完整性试验不太可行，只能是肉眼大致观察。因此，做滤
1.针头滤器的使用丁香园网友heyj的观点为：用滤膜孔径为0.22um的一次性针头滤器过滤胰酶，一次可以过滤100ml。如果想一次性过滤完可以准备1-2个备用的。注意在配胰酶溶液时尽量完全溶解，否则未溶的颗粒会堵住滤孔影响过滤速度。本人认为过滤效果与滤过的液体量无关。丁香园网友ssl3304的观点为：过滤0.25的胰酶，一次可以滤1L，没有问题的，培养基最多300-400ml，总之一定要充分溶解后再过滤。丁香园网友shaoqianqian的观点为：滤200ml培养液足够了，可是不能滤加
从单个小鼠肿瘤样本中分选高纯度、高活性 TIL 细胞亚群的完整工作流程
封闭的无污染的一次性分选盒中进行，分选过程中不会有气溶胶的产生。因此既可保障不同的分选过程不会发生样品间交叉污染，又可以最大限度的保障实验室操作人员的安全。 实验结果及分析 1. 组织解离器和磁珠分选仪可以为细胞分选提供高纯度和高活力的 TIL 细胞。 小鼠肿瘤组织经分离试剂进行单细胞分离和磁珠分选仪的预富集，可提供纯度高达 81.5% TIL 细胞样本用于随后的细胞分选 (见图 A，经特异性免疫磁性预富集后的 CD45+ 肿瘤浸润性淋巴细胞 , TILs)。 2. MACSQuant® Tyto® 细胞
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