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文献和实验根据其组成从浅蓝色至品红色。 8. 显示胶原纤维、细胞和肌肉的新染法 [固定]中性甲醛液,石蜡切片。 [试剂配制] (1)Ponceau's染色液 0.5%Pohceau's(丽春红S,上海试剂三厂)水溶液l0~15ml,苦味酸饱和水溶液85~90ml。 (2)Victoria blue'B 染色液 Victoria blue'B(维多利亚蓝,B,上海试剂三厂) 0.5 g, 70%乙醇100m1。 [染色方法] (1)组织切片脱蜡至水。 (2)70%乙醇稍洗后,入
,直接溶解上样。 3 分泌蛋白的提取(特例): 直接收集分泌液,加入β-ME、溴酚蓝制样。 B:蛋白的定量方法及影响蛋白定量原因 1.双缩脲法: 双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法。在需要快速,但不很准确的测定中,常用此法。硫铵不干扰显色,这对蛋白质提纯的早期阶段是非常有利的。双缩脲法的原理是Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。双缩脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白质溶液测定。干扰物有硫醇,以及具有肽性质缓冲
0.5g溶于10ml 100%的DMF内,混匀。4℃或分装存于-20℃,用前恢复至室温。 C.显色液:取A液40ul,加入到盛有10ml的0.1mol/l Tris-HCl(pH9.5,钤0.1mol/L NaCl、5mmol/L MgCl2)管内,充分混匀;再加入B液40ul,轻轻混合即可。最好用前新鲜配制。 NBT即四唑氮蓝(Nitro-Blue-Tetrazolium),MW=818,为深蓝色无定形微溶物质。BCIP即5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(5-bromo-4-chloro
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