NMY51酵母感受态细胞

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产品编码	产品名称	品牌	规格
HZ145-100	NMY51酵母感受态细胞	HZbscience	10*100ul
HZ145-100	NMY51酵母感受态细胞	HZbscience	20*100ul

NMY51 Chemically Competent Cell 产品说明书


NMY51：                      10×100μl            保存条件：- 80℃
PGADT7（control vector）：10ng/μl     10μl            保存条件：  4℃
Carrier DNA：            5ug/μl   100  μl            保存条件： -20℃
PEG/LiAc ：                       5  ml            保存条件：  4℃


NMY51酵母感受态细胞基因型
MATa his3Δ200 trp1-901 leu2-3,112 ade2 LYS2::(lexAop)4-HIS3 ura3::(lexAop)8-lacZ ade2::(lexAop) 8-ADE2 GAL4
 
NMY51酵母感受态细胞操作方法

1. 取100 ul冰上融化的NMY51感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5ug，Carrier DNA（95-100度5min快速冰浴，重复一次）10 ul ，PEG/liAC  500ul并吸打几次混匀，30度水浴30 分钟（15 min时翻转6-8次混匀）。
2. 将管放42度水浴15min  （7.5 min时翻转6-8次混匀）。  
3. 5000 rpm 离心 40s 弃上清，ddH2O 400ul 重悬，离心 30s 弃上清。                      
4. ddH2O 50ul重悬，涂板,29℃培养48-80h。
 
Preparation of Media：
YPDA （1L）:
 Tryptone               20g
 yeast extract            10g 
 0.2% adenine           15ml
 补水到 950ml，  用盐酸调PH到6.5
 Agar                20g (for plates only)
 121度，15分钟高压灭菌，待培养基温度降到55度时，加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml
 
0.2% adenine(1L)
 Adenine    2g
 补水     到1L
 溶解后高压灭菌
 或0.22um 滤膜过滤除菌
 
NMY51酵母感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4. NMY51酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
5. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。