- ¥180 - 1850
- YBscience
- YB145-100S
- 进口/国产
- 2025年07月05日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
NMY51 Chemically Competent Cell
- 保质期：
三年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
10×100ul / 20×100ul
| 产品编码 | 产品名称 | 品牌 | 规格 |
| YB145-100S | NMY51酵母感受态细胞 | 10*100ul | |
| YB145-100 | NMY51酵母感受态细胞 | 20*100ul |
NMY51 Chemically Competent Cell 产品说明书
NMY51： 10×100μl 保存条件：- 80℃
PGADT7（control vector）：10ng/μl 10μl 保存条件： 4℃
Carrier DNA： 5ug/μl 100 μl 保存条件： -20℃
PEG/LiAc ： 5 ml 保存条件： 4℃
NMY51酵母感受态细胞基因型
MATa his3Δ200 trp1-901 leu2-3,112 ade2 LYS2::(lexAop)4-HIS3 ura3::(lexAop)8-lacZ ade2::(lexAop) 8-ADE2 GAL4
NMY51酵母感受态细胞操作方法
1. 取100 ul冰上融化的NMY51感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5ug，Carrier DNA（95-100度5min快速冰浴，重复一次）10 ul ，PEG/liAC 500ul并吸打几次混匀，30度水浴30 分钟（15 min时翻转6-8次混匀）。
2. 将管放42度水浴15min （7.5 min时翻转6-8次混匀）。
3. 5000 rpm 离心 40s 弃上清，ddH2O 400ul 重悬，离心 30s 弃上清。
4. ddH2O 50ul重悬，涂板,29℃培养48-80h。
Preparation of Media：
YPDA （1L）:
Tryptone 20g
yeast extract 10g
0.2% adenine 15ml
补水到 950ml， 用盐酸调PH到6.5
Agar 20g (for plates only)
121度，15分钟高压灭菌，待培养基温度降到55度时，加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml
0.2% adenine(1L)
Adenine 2g
补水 到1L
溶解后高压灭菌
或0.22um 滤膜过滤除菌
NMY51酵母感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4. NMY51酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
5. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。
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文献和实验相关专题 酵母感受态细胞制备可以：(1)用于建立酵母转化体系;(2)用于酵母表达系统 构建;(3)用于酵母其他分子生物学研究。 一、试剂与耗材 1. 试剂 细菌用-酵母提取物(Fisher)、 细菌用-蛋白胨(Fisher)、葡萄糖(Fisher)、细菌用-琼脂粉、去离子水、甘油(Sigma)、二甲基亚砜(Sigma)、聚乙二醇3350(Sigma)、醋酸锂(Sigma)、鲑鱼精子细胞DNA
1.5ml缓冲液B，彻底混匀； 30℃水浴孵育1h； 室温下2000g离心10min，去除上清液，菌体沉淀重悬于1.5ml缓冲液C中； 离心样品，去除上清液，轻微操作将样品重悬于0.2ml缓冲液C中； 将所有转化液铺于选择性平板，于30℃孵育3～4天后，鉴定； 3、毕氏酵母电转化法 （1）E.coli TOP10F’感受态细胞的制备 取10ul TOP10F’菌液，接种于200ml LB液体培养基中活化培养，37℃，200 rpm，16～18小时。取100ul菌液接种于200ml液体LB
酿酒酵母感受态细胞的制备 （1）从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 ml YPD液体培养基，30℃，250 rpm 培养过夜。 （2）测定过夜培养物的OD600值为3.0~5.0之间。 （3）将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2~0.4。 （4）在28~30℃摇床中继续培养3~6 hr，使其OD600值达到0.6~1.0。 （5）于室温1500 g 离心5 min 收集酵母细胞，弃上清。 （6）用10 ml 洗液洗酵母
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